Catepsina B media el efecto antitumoral de BCG en células de cáncer de vejiga por la vía apoptótica intrínseca

SANDES, EDUARDO; LODILLINSKY, CATALINA; CWIRENBAUM, RUTH; ALVAREZ, VALERIA; CASABÉ, ALBERTO; ANA MARIA EIJÁN

BUENOS AIRES

Congreso; LI Reunión científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La administración intravesical del bacilo Calmette-Guerin (BCG), es una de las terapias más efectivas en el cáncer de vejiga (CaV) in situ, superficial de alto grado o recurrente. BCG induce una respuesta inmune local, sin embargo, se ha propuesto también un efecto directo sobre la célula tumoral, que es poco conocido. En el mecanismo de muerte celular pueden estar involucradas proteasas lisosomales como catepsina B (CB). Objetivo: estudiar el efecto citotóxico de BCG en células de CaV humanas y murinas y el  rol de la CB en el mismo. Materiales y métodos: se emplearon células de CaV humanas T24 y murinas MB49 y MBT2, BCG cepa Pasteur (3x106 UFC/mg) y el inhibidor de CB CA074Me (CA). Las células se tratan con BCG (2mg/ml) por 48 hs con y sin CA. La inhibición del crecimiento se evaluó con MTS y recuento celular. La tinción con naranja de acridina/bromuro de etidio se usó para determinar apoptosis. La expresión de CB se evaluó por Western blot (W-b) con un anticuerpo específico y la actividad con un método colorimétrico con un sustrato específico. La vía apoptótica involucrada se evaluó por W-b con inmunodetección de Bid y Caspasa 9. Test estadístico ANOVA/Bonferroni. Resultados: BCG inhibe significativamente (p<0,01) el crecimiento de MB49:65%, T24:40% y MBT2:30%; efecto parcialmente bloqueado por CA en las tres líneas (p<0,05). BCG aumenta la expresión de CB 5,7 ± 0,8 mg vs 3,4 ± 0,4 mg sin BCG en T24 (p<0,01). La actividad expresada en UI de papaína/106 células aumenta en T24 de 5,1 ± 0,2 a 7,2 ± 0,3 y en MB49 de 4,3 ± 0,2 a 5,1 ± 0,2 (p<0,01), inhibido por CA. Con BCG hay aumento significativo de células apoptóticas T24:40%, MB49:50% y MBT2:67% (p<0,01 vs sin BCG), el CA  lo inhibe significativamente. En células T24 y MB49 observamos activación de Bid y caspasa 9, bloqueado con CA. Conclusión: La BCG induce apoptosis en células de CaV, mediado por CB activando proteínas de la vía intrínseca.