Estudios funcionales del microRNA miR-71 y efectos en el desarrollo en parásitos cestodes modelo

GRECCO, ANDRÉS; MACCHIAROLI, NATALIA; CUCHER, MARCELA; ROSENZVIT, MARA

La Plata

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2023

Mesocestoides vogae es un parásito validado como modelo de estudio de la clase Cestoda, la cual incluye especies como Echinococcus granulosus sensu lato que causa equinococosis quística. Los microRNAs (miRNAs) son pequeños RNAs no codificantes, cuyo rol principal es la regulación de la expresión génica a nivel post-transcripcional. miR-71 es un miRNA altamente expresado en cestodos y ausente en vertebrados que representa un potencial blanco selectivo de drogas. El objetivo de este trabajo es lograr el silenciamiento in vitro de miR-71 en tetratiridios (estadio larvario de M. vogae) e identificar sus genes blanco. Además, se pretende analizar los efectos del silenciamiento en el desarrollo y la capacidad de infección. Se utilizaron anti-miRs (oligonucleótidos complementarios al miRNA que bloquean su función) para el silenciamiento. La predicción de genes blanco se realizó con algoritmos bioinformáticos y la expresión de miR-71 y de sus genes blanco se cuantificó por RT-qPCR. Se evaluó la estrobilización por inducción con taurocolato de sodio. Finalmente, se inocularon parásitos previamente silenciados en ratones BALB/c para analizar el efecto en la capacidad de infección. La transfección con anti-miR-71 produjo un silenciamiento de miR-71 del 64%, siendo el primer reporte de silenciamiento de miRNAs en cestodos. Entre los genes blanco se encontraron factores de transcripción relacionados con desarrollo. Se observó una mayor tasa de estrobilización en parásitos tratados con anti-miR-71, sugiriendo que miR71 regula genes relacionados con este proceso. En ratones inoculados con parásitos con miR71 silenciado la masa parasitaria obtenida fue tres veces menor que en los controles, sugiriendo que miR-71 tiene efecto en la capacidad de infección. Estos resultados brindan conocimiento sobre la función de los miRNAs en la biología de parásitos cestodos y sientan la base para el análisis de su potencial como blancos de drogas de enfermedades parasitarias