Inducción de la fosforilación de Akt, FOXO 3a y Hsp27 por el extracto liposoluble de Nicotiana glauca en células de rabdomiosarcoma embrionario.

FRATTINI NATALIA; PULIDO CARRASQUERO ALCIBETH; BLANCO NICOLAS; PRONSATO LUCÍA; MILANESI LORENA; VASCONSUELO, ANDREA

Jornada; XXXI Jornadas cientificas "Dr. Juan Carlos Plunkett"; 2023

Introducción: El Rabdomiosarcoma es un tumor maligno, común en niños y adolescentes. Su origen es el músculo esquelético; surge a partir de alteraciones en la regulación del crecimiento y diferenciación de las células precursoras de la miogénesis. Se caracteriza por su resistencia a la apoptosis, por lo que las terapias oncológicas son poco efectivas. Investigaciones previas en nuestro laboratorio demostraron un efecto apoptótico en la línea celular de rabdomiosarcoma embrionario (RD) cuando son expuestas al extracto liposoluble de Nicotiana glauca (N.g). N.g. es una planta arbustiva perteneciente a la familia de las Solanáceas. Especies de esta familia han demostrado tener propiedades farmacológicas. Objetivo: Estudiar el mecanismo molecular subyacente al efecto apoptótico observado en las células RD, en respuesta al tratamiento con el extracto liposoluble de N.g. Aspectos metodológicos: Las células RD fueron tratadas con el extracto liposoluble de N.g. disuelto en medio DMEM (1:1000) sin suero fetal bovino. Los tiempos de exposición fueron de 1, 2 y 4 horas para los ensayos de Western Blot, y de 15 y 30 minutos para los ensayos inmunocitoquímicos. Los resultados obtenidos fueron cuantificados utilizando el programa imageJ expresando los resultados en porcentaje con respecto al control. Resultados: Se observó un aumento del 51%, 60% y 54% en la fosforilación de Akt, quinasa vinculada a varios procesos de supervivencia celular, en los tiempos de 1, 2 y 4 horas de tratamiento respectivamente. En concordancia, mediante inmunocitoquímica se observó una activación de esta quinasa en tiempos cortos de exposición, 15 y 30 minutos. Además, se identificó un aumento del 20% en la fosforilación de FOXO 3a, uno de los posibles targets de Akt, a la hora de tratamiento. Éste es un factor de transcripción de genes proapoptóticos y se encuentra en un estado inactivo cuando es fosforilado por Akt. Asimismo, se observó 20%, 25% y 29% de aumento en la expresión de la chaperona Hsp27 durante la exposición de las células RD al extracto liposoluble de N.g por 1, 2 y 4 horas respectivamente; y un aumento en la fosforilación de la misma, cuyos porcentajes obtenidos fueron de 25%, 33% y 49% para las condiciones de 1, 2 y 4 horas de tratamiento respectivamente. El aumento en la expresión y fosforilación de Hsp27 se encuentra relacionado con la estabilidad del citoesqueleto frente a situaciones de estrés celular. Conclusiones: Los datos preliminares aquí presentados sugieren que en la línea celular RD se activa un mecanismo de defensa mediado por Akt, FOXO 3a y Hsp27, como primera respuesta a la acción apoptótica del extracto liposoluble de N.g. Discusión: El descubrimiento de proteínas involucradas en la vía molecular que precede a la apoptosis en células RD, permitiría el conocimiento de nuevos targets moleculares a los cuales podrían ir dirigidos componentes obtenidos de N.g. en futuras terapias antitumorales.