En ausencia del canal SLO3, los espermatozoides murinos incubados en condiciones capacitantes presentan curvamiento del flagelo

GOMEZ OLIVIERI LR; BALESTRINI PA; SANTI CELIA; MARIN BRIGGILER, CI; LUQUE GM; BUFFONE MG

Rosario

Congreso; IX Congreso Argentino de Andrología; 2023

Sociedad Argentina de Andrología

En ausencia del canal SLO3, los espermatozoides murinos incubados en condiciones capacitantes presentan curvamiento del flageloGómez Olivieri, L.R. (1); Balestrini, P.A. (1); Santi, C. (2); Marin Briggiler, C.I. (1); Luque, G.M. (1); Buffone, M.G. (1)(1) Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME), Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Buenos Aires, Argentina. (2) Department of obstetrics and Gynecology, Washington University, St Louis, MO. USA.lgomezolivieri@gmail.comLos espermatozoides de mamíferos eyaculados no presentan la capacidad de fecundar al oocito, sino que adquieren dicha capacidad fecundante durante la capacitación. Dicho proceso ocurre en el tracto femenino e involucra cambios en el espermatozoide, tales como, una hiperpolarización de la membrana plasmática y la pérdida del acrosoma, entre otros. Este cambio en el potencial de membrana resulta esencial para que el espermatozoide pueda sufrir la reacción acrosomal, y en el ratón, depende principalmente de un canal de potasio específico del espermatozoide llamado SLO3. En este trabajo, mediante el uso de ratones SLO3 KO, se observó que una fracción de los espermatozoides (~50%, KO vs control, p valor < 0.05) presentan un curvamiento del flagelo, conocido como hairpin, al ser incubados en condiciones capacitantes (con Ca2+, albúmina de suero bovino (BSA) y bicarbonato (HCO3-)). Además, se observó que el aumento de hairpin ocurre rápidamente, dentro de los primeros 15 minutos de incubación. Con el fin de evaluar si el cambio morfológico no es producto de las incubaciones in vitro, se realizaron experimentos en donde los espermatozoides fueron obtenidos de los úteros de las hembras que se aparearon con ratones SLO3 WT y KO. Al igual que lo observado en el experimento in vitro, los espermatozoides del ratón SLO3 KO presentaron un aumento del hairpin. Con el objetivo de dilucidar cuál podría ser la posible causa del hairpin en los espermatozoides del ratón SLO3 KO, las células se capacitaron en distintas condiciones in vitro. A modo de evaluar si las fallas en la hiperpolarización de la membrana podrían asociarse al hairpin, las células fueron incubadas con compuestos que inducen hiperpolarización de la membrana plasmática, como valinomicina (ionóforo de K+), amiloride (inhibidor de canales de Na+) o genisteína (inhibidor del canal voltaje dependiente CFTR). Únicamente el agregado de valinomicina produjo una disminución significativa del hairpin (p valor < 0.05). Por otro lado, se testeó si el agregado de BSA durante la capacitación, al afectar la BSA la fluidez de la membrana por la remoción de colesterol, podría asociarse al cambio morfológico en ausencia de SLO3. Se incubaron a los espermatozoides sólo agregando BSA o solo agregando HCO3-, y únicamente se observó un incremento de hairpin en la condición donde se agregó BSA (p valor < 0.05). Para determinar si el aumento de hairpin asociado al agregado de BSA se debe a la remoción de colesterol, se utilizó un análogo de la remoción de colesterol llamado ciclodextrina, y también se observó dicho aumento de hairpin en los espermatozoides del ratón SLO3 KO. Finalmente, las células fueron incubadas con sulfato de colesterol, para saturar los dominios hidrofóbicos de la BSA e impedir que esta pueda captar el colesterol en la membrana. En dicha condición, no se observó el aumento de hairpin. En conclusión, los espermatozoides del ratón SLO3 KO, tanto in vitro como in vivo, desarrollan defectos morfológicos durante la capacitación, los cuáles no pueden ser explicados únicamente por cambios en el potencial de membrana, y que podrían estar asociados a cambios en la fluidez de la membrana por la remoción de colesterol.