Nivel de expresión del gen que codifica para la enzima EPSPS en biotipos de Lolium multiflorum resistentes al herbicida glifosato

DIEZ DE ULZURRUM PATRICIA; MASSA GABRIELA ALEJANDRA; LEADEN MARIA INES; FEINGOLD SERGIO ENRIQUE

Simposio; VIII Simposio Argentina 2011 "La Biotecnología entre nosotros"; 2011

REDBIO

La resistencia a herbicidas asociada a incrementos en la expresión de un gen (que codifica para la enzima blanco) involucra una serie de procesos que provocan una mayor cantidad de copias activas de la enzima en los biotipos resistentes. inlcuir aqui glifosato-target EPSPS. El objetivo del presente estudio fue determinar la expresión del gen que codifica para la enzima 5-enolpiruvil-shiquimato-3-fosfato sintetasa (EPSPS) en biotipos resistentes y susceptibles a glifosato en tres poblaciones de L. multiflorum. Se utilizaron 5 genotipos por duplicado, los mismos fueron pulverizados con una dosis de 1500 g e.a. ha -1 de glifosato. Se realizaron extracciones de ARN, a las 0 y 48 hs después de la aplicación del herbicida para  cuantificar el nivel de expresión basal e inducido. Se utilizó el gen que codifica para el  factor de elongación 1-α (EF1-α) como gen de referencia. Se realizó la cuantificación relativa de la expresión en reacciones de  PCR en tiempo real.  El nivel de expresión se calculó mediante la fórmula de Pffaf (2004). La expresión relativa de EPSPS en la población susceptible B2, a las 0 hs post-aplicación se consideró 1 (gen calibrador). La expresión relativa del gen EPSPS no difirió significativamente según el test de Tukey (p>0.05) en ninguna población tanto a las 0 como a las 48 hs postaplicación de glifosato. Por medio de contrastes ortogonales se realizó la comparación de la expresión de las 0 hs versus 48 hs para cada población individual, observando, un aumento significativo a las 48 hs postaplicación en las dos poblaciones resistentes (p< 0.05). Dicho comportamiento  indicaría una expresión inducida por las aplicaciones de glifosato en los biotipos resistentes. No obstante, debido a que los incrementos en el nivel de expresión del gen EPSPS no fueron significativos en las poblaciones resistentes, se concluye que  la sobreexpresión no es el mecanismo responsable de la resistencia a glifosato en las poblaciones analizadas.