Terapia Fotodinámica en el Tratamiento de lesiones ateroscleróticas utilizando derivados dendríticos del ácido 5-aminolevilínico: estudios in vitro.

CALVO, GUSTAVO; CÉSPEDES, MARIELA A.; SAENZ, DANIEL; JEREZ PELLEGRINO, T; VALLECORSA, PABLO; BATLLE, ALCIRA; CASAS, ADRIANA; DI VENOSA, GABRIELA

San Carlos de Bariloche

Congreso; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos. GRAFOB; 2018

Grupo Argentino de Fotobiología

La Terapia Fotodinámica (TFD) es un tratamiento en el cual se combina unfotosensibilizante (Fs) y luz de longitud de onda adecuada dentro de la célulablanco. Esta combinación da lugar la generación de especies reactivas deoxígeno y radicales libres, que provocan la muerte celular. La fotosensibilizaciónpuede ser mediada por porfirinas endógenas, sintetizadas a partir del precursorácido 5-aminolevulínico (ALA). Típicamente se utiliza en el tratamientoantitumoral y de microorganismos, pero también está planteado su uso para eltratamiento de lesiones ateroscleróticas. Para mejorar la entrada de ALA en lascélulas, se ha utilizado la estrategia de sintetizar derivados que aumentan sulipofilicidad, ya que el ALA es hidrofílico. Un ejemplo son los dendrímeros quecontienen varias moléculas de ALA. Una desventaja de su uso en TFD ha sido lacaptación por el sistema reticuloendotelial, ya que este secuestra moléculas depro-Fs que deberían llegar hasta el tumor; sin embargo, esto constituye unaventaja para el tratamiento de placas de ateroma, ya que permite laincorporación selectiva de dendrímeros por las macrófagos que forman parte de esta.El objetivo del trabajo ha sido estudiar tanto la captación de loscompuestos, como a la respuesta a la TFD, empleando 2 dendrímeros conteniendo 6o 9 molécula de ALA (6m-ALA y 9m-ALA), y usando como modelo dos líneascelulares: células endoteliales Hmec-1, y células macrofágicas Raw264.7. Se evaluó la síntesis de porfirinas a partir de los dendrímeros, porextracción química y cuantificación de fluorescencia. Los resultados mostraronuna mayor síntesis de porfirinas en los macrófagos (6m-ALA= 52 ± 6 UF, 9m-ALA=59 ± 7 UF) que en las células de endotelio (6m-ALA= 28 ± 3 UF, 9m-ALA= 27 ± 2UF) La respuesta a la terapia se evaluó viendo la viabilidad de las células,y cualitativamente por microscopia. La LD50 se calculó como la dosis de luz(Joules/cm2) necesaria para matar el 50% de las células. Losresultados mostraron una mayor sensibilidad a la TFD por parte de la líneaRaw264.7 (LD50=11,7 mJ/cm2), comparada con las Hmec-1 (LD50=44,6mJ/cm2), lo que fue consistente con una mayor síntesis de porfirinas.En el análisis cualitativo del co-cultivo, se vio por microscopía defluorescencia, una mayor síntesis de porfirinas y una mayor respuesta a laterapia en las células Raw 264.7 que en las Hmec-1.Por citometría de flujo usando el kit anexina/ioduro de propidio, se vioque luego de la TFD utilizando dendrímeros los macrófagos mueren por apoptosis,mientras que las células endoteliales no son dañadas. Como conclusión, podemos decir que los dendrímeros de ALA son unaalternativa promisoria para el tratamiento de placas ateromatosas, ya quemuestran in vitro tener selectividadpor las células macrofágicas, que in vivoestán formando parte del tejido aterosclerótico.