Inactivación de células leucémicas humanas k562 mediante la fotosensibilización de una antraquinona natural.

MUGAS, MARÍA LAURA; JEREZ PELLEGRINO, T; CÉSPEDES, MARIELA A.; CALVO, GUSTAVO; SAENZ, DANIEL; DI VENOSA, GABRIELA; NUÑEZ MONTOYA, SUSANA; CASAS, ADRIANA

San Carlos de Bariloche

Exposici�n; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos. GRAFOB; 2018

Grupo Argentino de Fotobiología

Lasantraquinonas (AQs) presentan ciertas características estructurales que lasdefinen como fotosensibilizadores (FS). Son moléculas planas, rígidas, con altogrado de conjugación aromática que les permite absorber luz de una determinada longitudde onda1,2. El grupo de Farmacognosia ha logrado evaluar laspropiedades fotosensibilizantes de una gran variedad de AQs, aisladas dediferentes especies vegetales argentinas. Parietina (PT:1,8-dihidroxi-3-metoxi-6-metilantraquinona), purificada del líquen Teloschistes flavicans (Sw.) Norm, hademostrado ser un buen FS con aplicaciones promisorias en fotoinactivaciónbacteriana3.El objetivo del presente trabajo fue evaluar la actividad de PT comofotosensibilizador sobre células leucémicas humanas K562 invitro; a fin de estimar su potencial uso en la TerapiaFotodinámica del cáncer (TFD).La pureza de PT se determinó mediante HPLC. Lascélulas K562 se emplearon en estado de semiconfluencia, y fueron expuestas adiferentes concentraciones de PT (RPMI con DMSO ≤ 1%). Se realizaronensayos de toxicidad (sin luz) con 24 h de exposición a PT, paradeterminar la Concentración Inhibitoria 50 (CI50) y la Máxima ConcentraciónNo Citotóxica4 (MCNC) en oscuridad. La MCNC y MCNC/2 fueron lasconcentraciones utilizadas para evaluar la foto-inactivación. Después deincubar las células con las 2 concentraciones de PT (37 °C, 24 h), se procedióa la irradiación con distintas dosis de energía, variando los tiempos deexposición a la luz (0 a 90 min). Como fuentes de irradiación seutilizaron: una lámpara actínica (Philips TL 20W/03 RS, 20 W) y 2 lámparasazules bajo consumo (Sica, 15 W). Luego de la irradiación, se incubó19 h para evaluar el fotodaño, cuantificando la viabilidad por MTT5.Se determinó la dosis de luz que produce el 50 % de muerte celular (dosisletal lumínica 50, DL50) en presencia de PT.PT (pureza de 91,2 ± 0,2 %)presentó una CI50=21 µM en la línea celular K562, y unaMCNC=10 µM. Los espectros de emisión de los sistemas de irradiaciónevidenciaron que la lámpara actínica emite en el rango de 380-480 nm,mientras que la lámpara azul emite de los 400-500 nm. Además, se determinóque la máxima exposición de estas células a la luz sin provocar toxicidad per se fue de 15 min (actínica,potencia 1,18 mW/cm2) y 90 min (azul, potencia 4,72 mW/cm2).Con luz actínica no se observó fotoinactivación significativa a los tiemposempleados, mientras que con la azul, la DL50 fue 11,32J/cm2 (40 min), empleando PT a 10 µM. Por lo cual, esta AQdemostró inducir foto-destrucción de las células leucémicas, a concentracionesque no son tóxicas en condiciones de oscuridad. Los resultados de estetrabajo confirman elpotencial uso de parietina en TFD, apoyando las recomendaciones de la OMS de revalorizar laFitomedicina y considerar las propiedades curativas de la flora del país.Actualmente, continuamos estudiando la fotosensibilización mediada por PT sobrelíneas de tumores sólidos, así como en células normales.   Referencias 1- Baltazar L., Ray A., Santos D., Frontiers in Microbiology, 6, 202, 2015. 2- Hamblin M., Current Opinion in Microbiology, 33, 67, 2016.3- Comini L., Morán Vieyra F., MignoneR., et al., Photochem. Photobiol. Sci.,16, 201, 2017. 4- Liu A., Shu S., Qin H., Lee S.,Wang Y., Du G., Planta Med., 75, 137, 2009.5- Denizot F, Lang R., J. Immunol.Methods., 89, 271, 1986.