Estudio de cuatro nuevos derivados del 5-ALA en el tratamiento fotodinámico de células de linfoma cutáneo T.

VALLECORSA, P; DI VENOSA, G; SAENZ, D; CALVO, G; GOLA G; RAMIREZ J; BATLLE, A; CASAS, A

CABA

Congreso; 17° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2018

Hospital de Clínicas "José de San Martín", Universidad de Buenos Aires

0184 - ESTUDIO DE CUATRO NUEVOS DERIVADOSDEL 5-ALA EN EL TRATAMIENTO FOTODINAMICO DE CÉLULAS DE LINFOMA CUTÁNEO TPablo VALLECORSA(1) | Gabriela DI VENOSA(1)| Daniel SÁENZ(1) | Gustavo CALVO(1) | Gabriel GOLA(2) | Javier RAMIREZ(2) |Alcira BATLLE(1) | Adriana CASAS(1) CIPYP-CONICET- HOSPITAL DE CLÍNICAS JOSÉ DESAN MARTÍN-UBA (1); FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES (2) Modalidad: Poster Científico (excluyeReporte de Un Caso) Unidad Temática: Oncología Objetivos: Se evaluó laterapia fotodinámica (TFD), empleando el ácido 5 aminolevúlico (ALA) y cuatronuevos derivados esterificados en las líneas de Linfoma Cutáneo de Células T(LCCT). El objetivo perseguido es encontrar potenciales pro-fotosensibilizantespara tratar esta patología, la cual gracias a sus característicasfisioanatómicas resulta un blanco potencial de la TFD. Materiales y Métodos: ?LÍNEAS CELULARES YCULTIVO CELULAR. Myla y Hut78, ambas lineas de LCCT, se cultivan y mantienen enmedio RPMI-1640, L-glutamina 2 mM, gentamicina 40 ug/ml y SFB 10%, a 37ºC enuna atmósfera CO2 5%. ?ENSAYO DE VIABILIDAD DE MTT. La relación fototoxicidadfue determinada mediante el ensayo de MTT. Luego de los tratamientos, se agregóen cada pocillo, 0,5 mg/mL de MTT y se incubaron a 37º C por 1 h. Comoresultado se obtuvieron cristales de formazán, se disolvieron en DMSO y se leyóla absorbancia obtenida a 560 nm en un lector de placas (Spectra CountPackard). ?TRATAMIENTO DE TFD. Las células se incubaron en medio sin sueroconteniendo ALA o derivados y luego fueron irradiadas. A continuación, sereemplaza por medio fresco y se incubaron otras 19 h para permitir que ocurrael fotodaño, y se midió la viabilidad. Se define la dosis letal 50 (DL50)como la dosis de luz que produce el 50% de muerte celular. ?TRATAMIENTOLUMÍNICO. Se usaron dos tubos fluorescentes que producen un espectro de luzentre 400 y 700 nm, con máximo en 600 nm. Las placas se ubicaron a 20 cm de lafuente lumínica. Se utilizaron potencias entre 10 y 150 mJ/cm2 y la densidad depoder fue de 0,5 mW/cm2. ?EXTRACCIÓN DE PORFIRINAS DE LAS CÉLULAS. Las célulasse incubaron con diferentes concentraciones de ALA o sus derivados en medio sinsuero. Para extraer las porfirinas acumuladas en las células, se agregó 1 ml deHCl 5% y se dejó a 37º C media hora. Las porfirinas liberadas al medio, secuantificaron por el agregado directo de 2 ml de HCl 5%. Estas condicionesresultaron ser óptimas para una extracción completa de porfirinas. Lasmediciones se realizaron en un espectrofluorómetro Shimadzu RF 510, utilizandoel par excitación/emisión 406/604 nm, y empleando PpIX como estándar dereferencia. Resultados: La cantidades deporfirinas sintetizadas (ng de PPIX/105 cél) fue de 4 a 5 para ALA,me- y He-ALA, mientras que para el derivado A fue de 3.25 a 4.25, y para losderivados B, C, y D de entre 2 a 3. Para la TFD se utilizaron concentracionesbajas o plateau para las drogas más eficientes (0.25mM) por lo que las DL50obtenidas fueron de 0.12 para He-ALA, 0.16, 0.18, 0.24 y 0.23 para losderivados A, B, C, y D respectivamente, mientras que ALA y me-ALA no generaronfotodaño. Conclusiones: Se evaluó la TFDmediada por ALA y derivados en líneas de Linfoma Cutáneo de Células T, Myla(MF) y Hut78 (S. Sésary). La ALA-TFD mostró síntesis de porfirinas y efectofotodinámico similares a las observadas en líneas de tumores sólidos como lo esla línea LM3 de adenocarcinoma mamario. De los derivados de ALA clásicos, elHexil ALA demostró ser altamente más eficiente que ALA y Metil ALA. En cuanto alos cuatro nuevos derivados de ALA (el A, B, C y D), todos demostraron ser muybuenos pro-fotosensibilizantes, tan buenos como el Hexil ALA. Este tipo deestudios demuestra el potencial de la TFD en la patología, y el screening denuevos pro-fotosensibilizantes en busca de la mejora de la terapiafotodinámica. Dentro de las perspectivas a futuro se pretende generar un modelode CTCL en ratones inmunosuprimidos para evaluar la eficiencia de estoscompuestos.