DESARROLLO DE UN PROTOTIPO DE INMUNOCROMATOGRAFÍA DE FLUJO LATERAL PARA LA DETECCIÓN DE VIRUS SINCICIAL RESPIRATORIO EN MUESTRAS DE CULTIVO

JOAQUÍN S. RASCH; PATRICIO R. YBARRA; CONSTANZA Y. FLORES; DALILA SILVESTRE; JULIETA TOMÁS FARIÑA; MARCELO H. ARGÜELLES; C. FACUNDO TEMPRANA; GRACIELA GLIKMANN; ALEJANDRO A. CASTELLO; ESTEFANÍA S. PERI IBÁÑEZ; MARCELO G. MANDILE

Bernal, Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Investigadores e investigadoras en formación en ciencia y tecnología 2023; 2023

Departamento de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes

El virus sincicial respiratorio (VSR) es causante de infección respiratoria aguda, uno de los principales motivos de hospitalización de lactantes y niños y responsable de una importante morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes. El diagnóstico a corto plazo de este patógeno disminuye el tiempo de hospitalización, evita el uso innecesario de antibióticos y previene la transmisión intrahospitalaria. En la actualidad, el método de diagnóstico más utilizado es la inmunofluorescencia, que presenta un alto costo y complejidad en su realización. Si bien existen métodos de tipo Point of Care (POC) disponibles comercialmente, estos deben ser importados, limitando su acceso a nuestro país, en particular en zonas de bajos recursos. Así, el desarrollo de un método POC con insumos locales extendería su acceso a lo largo de todo el país y nos permitiría introducir innovaciones que puedan solventar su baja sensibilidad.El objetivo general del trabajo fue desarrollar un prototipo de inmunocromatografía de flujo lateral en formato de “media tira” y los objetivos específicos, la optimización de cada uno de los componentes del ensayo. En primer lugar, se llevó a cabo la producción de VSR de la cepa Long-A mediante la infección de cultivos de células Hep-2 y su posterior concentración por ultracentrifugación con el fin de utilizarlo como antígeno control. Se establecieron los parámetros de conjugación de nanopartículas de oro-anticuerpo anti-VSR y se caracterizaron por UV-Vis y DLS. Se diseñó un buffer de corrida evaluando diferentes componentes y porcentajes de detergente, observando la presencia de señal coloreada con el agregado de antígeno y la ausencia de señal inespecífica sin el agregado de antígeno, hasta definir un buffer compuesto por tricina y 1% de tween 20. De la misma manera, se evaluaron diferentes concentraciones y buffers de dispensado del anticuerpo anti-VSR en la línea de test y se eligió una concentración de 2 μg dispensado en buffer MES. Por último, se hizo una primera estimación de la sensibilidad del prototipo contra el ensayo ELISA desarrollado in house, observando un buen desempeño. En conclusión, se logró la producción y concentración de VSR y se obtuvieron resultados exitosos en los test en formato media tira, observándose señal positiva con el antígeno y sin evidenciarse falsos positivos. Si bien el prototipo tuvo un buen desempeño en comparación al ELISA, continuamos trabajando con el objetivo de aumentar su sensibilidad y posteriormente proceder con los ensayos de tira completa con la finalidad de evaluar el método en muestras de pacientes.