DESARROLLO DE MÉTODOS DE BASE INMUNOLÓGICA PARA LA DETECCIÓN DE LA INFECCIÓN AGUDA POR EL VIRUS DEL DENGUE

ESTEFANÍA S. PERI IBAÑEZ; MARCELO H. ARGÜELLES; CONSTANZA Y. FLORES; DALILA SILVESTRE; JULIETA TOMÁS FARIÑA; MARCELO G. MANDILE; C. FACUNDO TEMPRANA; GRACIELA GLIKMANN; MARIANO GRASSELLI; ALEJANDRO A. CASTELLO

Bernal, Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Investigadores e investigadoras en formación en ciencia y tecnología 2023; 2023

Departamento de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes

La incidencia del virus del dengue (DENV) se ha incrementado dramáticamente en las últimas décadas en todo el mundo y se estima que ocurren unos 50-100 millones de casos anuales. En Argentina, hasta la semana epidemiológica 28/2023, se registraron 129.150 casos, que representa un aumento de un 45,89% en comparación al último brote epidemiológico de la temporada 2019/2020. Argentina y la mayoría de los países limítrofes han reportado la co-circulación de más de un serotipo con una incidencia variable entre los distintos brotes. Ante una presentación febril compatible con DENV, los test de laboratorio son esenciales para el diagnóstico preciso sobre todo para aquellos que manifiestan signos y síntomas severos ya que el tratamiento y manejo apropiado deben ser administrados tempranamente para evitar, en lo posible, fatalidades. Sin embargo, en muchos lugares donde es endémico, pero alejados de centros urbanos o donde la infección no se reconoce como prevalente, los recursos diagnósticos son escasos, de difícil acceso o directamente inexistentes. Por ello, en gran parte de la zona centro de nuestro país y regiones endémicas del norte, la disponibilidad de métodos de tipo Point of Care (POC) serían de gran utilidad. Teniendo como perspectiva a futuro el desarrollo de un método POC para la detección de DENV, se comenzó, en primera instancia, con la producción de anticuerpos contra la proteína NS1 de DENV-1 y la puesta a punto de un ensayo ELISA. Con este fin, se inmunizaron ratones con la proteína NS1 de DENV-1 recombinante comercial. Se obtuvo un suero hiperinmune para el cual se evaluó la reactividad mediante la titulación del mismo. Posteriormente se purificaron las IgGs y se biotinilaron para su uso en un ELISA en formato sandwich. Se pusieron a punto las condiciones de reacción del ELISA utilizando como antígeno a detectar la proteína recombinante. Una vez establecidos estos parámetros se evaluaron muestras de sueros de pacientes con diagnóstico positivo de DENV-1 y de individuos sanos. Al mismo tiempo realizó una comparación mediante un kit comercial de ELISA de determinación de NS1 de DENV. Nuestro método mostró un buen desempeño frente al método comercial, con un 84% de sensibilidad. Al momento de la presentación de este resumen, continuamos trabajando para mejorar el ensayo para que la sensibilidad del mismo alcance la del método comercial. Además, continuaremos trabajando en la producción de anticuerpos monoclonales y policlonales para los diferentes serotipos de NS1 con la finalidad de obtener múltiples moléculas de detección que puedan usarse en desarrollo del ensayo POC.