Estudio de la expresión de toxina Shiga 2 mediada por células mieloides infectadas por cepas de Escherichia coli enterohemorrágicas (EHEC)

BRUBALLA ANDREA; SHIROMIZU CAROLINA MAIUMI; SABBIONE FLORENCIA; PINEDA GONZALO; BERNAL ALAN MAURO; BOUVIER LEÓN; FERNÁNDEZ-BRANDO ROMINA; RAMOS MARÍA; TREVANI ANALÍA; MUÑOZ MANUEL; PALERMO MARINA

CABA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Las cepas enterohemorrágicas de Escherichia coli (EHEC), son patógenos transmitidos por los alimentos capaces de colonizar el intestino de los humanos y causar síndrome urémico hemolítico (SUH). La toxina Shiga (Stx) es el factor de las EHEC, y es codificado por un bacteriófago lisogénico incorporado al DNA bacteriano. Se compone de una subunidad A enzimáticamente activa (sub A) y una subunidad B pentamérica. La cepa O157:H7 (O157), que expresa la variante 2 de la Stx (Stx2), es una de las cepas más asociadas a esta enfermedad. Habiendo detectado la presencia de putativos promotores eucariotas en el gen de Stx2 y sabiendo que, estas bacterias se asocian a las Placas de Peyer del intestino, nuestro objetivo fue estudiar la interacción de la cepa O157 con macrófagos para evaluar si es posible, en el contexto de la infección, la expresión de la toxina mediada por estas células eucariotas.Con este fin, la línea celular macrofágica humana, THP-1, fue infectada utilizando distintas cepas, a saber: i) cepa O157 aislada de paciente, ii) la misma cepa pero sin expresión de toxina (stx2), iii) con la cepa no patógena C600 y iv) con una C600 lisogenizada con el bacteriófago 933W (C600Φ933W), productor de Stx2. Se evaluó la viabilidad celular mediante ensayos de MTT y la internalización de las bacterias mediante recuento de UFC. En los sobrenadantes (SN), se determinó la presencia de Stx2 mediante ensayo de citotoxicidad en células VERO y de IL-1por ELISA. A su vez, se evaluó la presencia de transcripto de sub A mediante qPCR con primers específicos utilizando como molde, en paralelo, cDNAs sintetizados con oligo-dT (OdT), random primers (RAN) ó en ausencia de primer como control (C).Se observó una disminución significativa de la viabilidad celular a partir de las 24h sólo en los macrófagos infectados con las bacterias capaces de expresar Stx2 (O157:52*%, stx2:125%, C600: 132%, C600Φ933W:61%*; *p