Evaluación de un ELISA para la detección de lipoarabinomamano (LAM) de micobacterias en orinas de conejos con paratuberculosis

BARNECH ML; JOLLY A.; FERNÁNDEZ B.; MUNDO SL.

CABA

Jornada; XII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2023

CyT, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA

La paratuberculosis es una enfermedad granulomatosa crónica intestinal causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), que afecta tanto animales domésticos como silvestres. El diagnóstico temprano de esta infección resulta un desafío. La detección de LAM en orina ha demostrado ser de utilidad para el diagnóstico de tuberculosis activa en humanos. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un ELISA para la detección de LAM (ELISA-LAM), empleando como reactivos anticuerpos obtenidos por inmunización de conejos y gallinas con LAM de MAP y MAP inactivada. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la aplicación de esta prueba permite detectar la infección temprana por MAP en conejos a través de una muestra de orina obtenida a los 145 días pos infección. Para esto, evaluamos muestras tomadas durante un ensayo de infección experimental de conejos (hembras, juveniles, New Zeland White, n=10) con MAP. A los 145 días post-desafío se realizó la eutanasia seguida de necropsia y se tomaron muestras de orina por punción vesical (CICUAL N°2021/26), que se conservaron congeladas a -80°C hasta su uso. Se evaluaron también muestras de 2 conejos sanos no desafiados (CN). Los resultados se muestran como Densidad Óptica promedio ((DO) ̅) ± Desvío Estándar (DS) entre al menos 2 determinaciones independientes de cada muestra. El valor de corte (VC) de la prueba se calculó como la (DO) ̅ de las 2 orinas CN + 5 DS. Se confirmó la infección en todos los conejos desafiados, mediante el aislamiento de MAP a partir de tejidos. De los 11 individuos con aislamiento positivo, tres de ellos presentaron señal en el ELISA-LAM (1.18±0.12; 1.15±0.12; 1.19±0.05), con VC=0.57. Los otros animales presentaron (DO) ̅ por debajo del valor de corte. Se profundizará la evaluación de las orinas positivas mediante Western blot utilizando los anticuerpos empleados en el ELISA, a los fines de confirmar si las bandas de interacción visualizadas son coincidentes con las del reconocimiento de MAP sonicada. De confirmar nuestros resultados a través del Western blot, podríamos avanzar en el estudio de muestras provenientes de bovinos para ver si esta prueba puede ser una herramienta adicional en el diagnóstico temprano de la paratuberculosis en los rodeos.