ESTUDIO DEL MPS EN LÍNEAS TRANSGÉNICAS DE DROSOPHILA MELANOGASTER USANDO NANOANTICUERPOS PARA SU DETECCIÓN

RAMOS, FABIAN O; SOSA, JULIETA, M; BRUNO VIGNOLO A; GAZAL, NAHIR, G; BRUNO, GUILLERMINA; GOROSTIZA AXEL; RAIMUNDA D; BISBAL, MARIANO; UNSAIN, NICOLAS

Córdoba

Congreso; XXVI JORNADAS CIENTÍFICAS SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CÓRDOBA; 2023

Sociedad de Biología de Cordoba

Los axones y las dendritas poseen una disposición particular de su esqueleto cortical, denominada esqueleto periódico de actina/espectrina asociada a la membrana (MPS, por sus siglas en inglés). El MPS es una estructura proteica periódica formada por "anillos" de actina situados transversalmente al axón y separados cada 190 nm por "espaciadores" de tetrámeros de α/β-espectrina, lo que hace que dichos períodos sólo sean visibles mediante microscopía de superresolución. Se piensa que esta es una estructura44estática en el tiempo, es decir, sin recambio de sus componentes. Debido a que esta hipótesis fue elaborada a partir de estudios realizados en células en cultivo, este proyecto prevé desarrollar una herramienta “in vivo” para su estudio, utilizando como modelo a Drosophila melanogaster. Dado que la β-espectrina se expresa en todas las células de la mosca, es necesario "marcar" la β-espectrina de forma específica para cada célula. Para ello, se planea producir una mosca transgénica mediante edición génica con CRISPR/Cas9, en la que el gen endógeno de la β-espectrina pueda recombinarse de una manera específica para cada tipo celular para incluir marcas en el extremo C-terminal que luego pueden ser detectadas por nanonticuerpos, realizando de esta manera experimentos del tipo “pulso y caza”. Brevemente, en una población neuronal específica se recombinará el gen que codifica para β-espectrina incluyendo así un péptido denominado ALFA (β-espectrina-ALFA), que luego puede ser reconocido por nanoanticuerpos específicos. Posteriormente esa subpoblación neuronal puede sufrir una segunda recombinación en el mismo gen para sustituir ALFA por otro péptido denominado BC2 (β-espectrina-BC2). Esta segunda marca se induce por administración de una droga, agregando así el control temporal a los ensayos propuestos, con el objetivo de aportar conocimiento sobre la dinámica del recambio, si existiera, de β-espectrina. En el presente trabajo se muestran los avances en los pasos de clonado molecular para la generación del plásmido conteniendo todas las modificaciones necesarias para la edición mediada por CRISPR/Cas9, así como la producción de los nanoanticuerpos para la detección de las marcas específicas β-espectrina-ALFA y β-espectrina-BC2. Esta mosca transgénica permitirá examinar las propiedades dinámicas del MPS en el tejido nervioso, constituyendo así una valiosa herramienta para la comunidad científica.