BECAS
CERRI Agustina
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de aptámeros específicos contra la proteína de la nucleocápside (N) de SARS-COV-2 para el desarrollo de un test rápido de detección de la infección
Autor/es:
JULIETA GARCÍA REY; AGUSTINA CERRI; TOMAS BELLANDI; DIEGO CHOUHY; ELISA BOLATTI; ADRIANA GIRI
Lugar:
Asunción
Reunión:
Jornada; XXX Jornada de Jóvenes Investigadores; 2023
Institución organizadora:
Asociación Universidades del Grupo Montevideo
Resumen:
Desde la identificación del coronavirus pandémico SARS-CoV-2, se han realizado esfuerzospara desarrollar y producir pruebas diagnósticas que permitan detectar tempranamente lainfección viral.Los aptámeros son moléculas de ADN o ARN simple hebra con estructura tridimensionalespecífica que pueden unirse con alta afinidad y especificidad a una amplia gama demoléculas y su producción requiere una infraestructura más sencilla y económica que lanecesaria para producir anticuerpos monoclonales (AcM).En este trabajo se propone la expresión y purificación de la proteína N recombinante deSARS-CoV-2 para evaluar la capacidad de unión de 5 aptámeros reportados en bibliografíaque podrán ser utilizados en el futuro como sensores moleculares en técnicascromatográficas.La expresión de la proteína N y su dominio de unión a ARN (RBD) se optimizó utilizando 12condiciones de inducción con diferentes concentraciones de IPTG, tiempos y temperaturasde incubación logrando concentraciones aproximadas de 10 mg/ml. La purificación de lasproteínas se realizó con esferas de sepharosa que permiten medir la intensidad defluorescencia del complejo Aptámero-Proteína utilizando citometría de flujo. Se calculó laconstante de disociación (Kd) como medida de afinidad.De los aptámeros evaluados, se seleccionaron dos con los valores más bajos de Kd A-61(22.34 nM) y A-15 (20.8 nM) y se realizaron pruebas de competencia para determinar siéstos mostraban afinidad por diferentes regiones de la proteína.Los resultados confirmaron que A-61 y A-15 no competían por el mismo sitio de unión,indicando que son candidatos prometedores para su implementación en el desarrollo yoptimización de una prueba de cromatografía lateral para el diagnóstico del SARS-CoV-2.