DIAGNOSTICO Y DIFERENCIACION DE CEPAS DE PARVOVIRUS CANINO MEDIANTE LA APLICACIÓN DE TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

GALLO CALDERON, MARINA; KELLER, LETICIA; CARINA ROMANUTTI; MATTION, NORA; JOSE LA TORRE

Congreso; VII JORNADAS INTERNACIONALES DE VETERINARIA PRÁCTICA; 2011

INTRODUCCION: El Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que provoca miocarditis y gastroenteritis hemorrágicas en cachorros, mostrando altas tasas de morbilidad y mortalidad. Sumado a que el PVC se libera en grandes cantidades (109 partículas virales por gramo de materia fecal), éste es sumamente resistente a los cambios bruscos de temperatura y pH, al éter, al cloroformo y a la acción de los desinfectantes comunes, por lo que las infecciones se diseminan con facilidad, persistiendo por tiempo prolongado en áreas contaminadas. Si bien existen vacunas comercialmente disponibles del tipo atenuadas, la evolución viral trajo como consecuencia la aparición de numerosos casos de PVC en todo el mundo, incluyendo a animales vacunados. Las variantes antigénicas, PVC2a y PVC2b, reemplazaron secuencialmente a la cepa original PVC2 (que se encuentra actualmente en las vacunas). En los últimos años, se ha descrito a nivel mundial, la aparición de una nueva cepa denominada PVC2c. Esta variante, tiene una sustitución aminoacídica de un ácido Aspártico por un ácido Glutámico en la posición 426 (sitio antigénico más importante) de la proteína viral VP2. Como el diagnóstico de PVC es generalmente difícil, dado que los signos clínicos pueden llegar a confundirse con otras enfermedades entéricas caninas, el objetivo del presente trabajo, fue por un lado, aplicar un método de diagnóstico molecular específico para detectar PVC y por otro lado, caracterizar mediante secuenciación, el ADN de PVC proveniente de muestras clínicas de animales enfermos. MATERIALES Y MÉTODOS: Entre los años 2008 y 2010, se recibieron en el laboratorio, 75 hisopados rectales tomados de animales de diferentes lugares del país, con sintomatología compatible con PVC. Cada muestra, fue acompañada de un formulario con información referida al animal. Luego del tratamiento de las muestras con proteinasa K en un buffer de lisis, se extrajo el ADN. El diagnóstico se realizó amplificando por PCR una región de 583 pares de bases (pb) del gen de la proteína viral 2 (VP2) de PVC, la cual incluye la posición aminoacídica 426. Este fragmento genómico, permite su secuenciamiento directo a partir del producto de PCR.Las secuencias obtenidas, se analizaron y alinearon utilizando el programa Clustal W. RESULTADOS: El ADN de PVC se detectó en 51 de los 75 hisopados rectales analizados (68%). Treinta y nueve de las 51 muestras PVC positivas (76%) se obtuvieron de perros que habían sido vacunados contra PVC al menos una vez, con diferentes vacunas comerciales. Nueve muestras, se obtuvieron de perros sin vacunar, y el estado de vacunación de los 3 animales restantes es desconocido. Se encontraron casos de animales enfermos, vacunados con diferentes marcas de vacunas. La cepa clásica ancestral PVC2 (presente en las vacunas comerciales), no se detectó en ninguna de las muestras clínicas. Los análisis de secuenciamiento, revelaron la presencia del aminoácido Asparragina (N) en la posición 426 de la VP2 en dos muestras, las cuales fueron identificadas como PVC2a. Tres de las muestras presentaban un aminoácido Acido Aspártico (D) en la misma posición consecuentemente caracterizadas como PVC2b y un total de 46 muestras (90%) presentaron la mutación Asp426Glu, lo cual llevó a identificarlas como PVC2c. DISCUSION: el análisis molecular de las cepas de PVC, reveló la presencia de la nueva cepa PVC2c en hisopados rectales de perros de la Republica Argentina. La metodología utilizada, permitió además diferenciar claramente, las cepas presentes en las vacunas comerciales, respecto de las cepas de campo. CONCLUSIONES: En este trabajo se reportaron secuencias provenientes de casos clínicos de PVC estudiados durante los años 2008 y 2010 en la República Argentina. De un total de 51 muestras positivas, 39 (76.4%) fueron obtenidas de perros vacunados y 9 (17.6%) se obtuvieron de perros sin vacunar. El 90% de los casos correspondió a animales infectados con PVC tipo 2c. Estos resultados sugieren que la nueva variante PVC2c se diseminó y reemplazó a las anteriores PVC2a y PVC2b convirtiéndose en la variante predominante encontrada en la población canina de la República Argentina.