Evaluación de la toxicidad de formulaciones de glifosato utilizando la línea celular humana HepG2.

COALOVA, ISIS; RIOS DE MOLINA M.C.; CHAUFAN, GABRIELA

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; Congreso de Ciencias Ambientales COPIME 2011; 2011

El herbicida n-fosfonometil glicina, comercialmente conocido como glifosato, es uno de los agroquímicos más utilizados en los campos de Argentina y el mundo. En agricultura se utilizan distintas formulaciones de este herbicida para el control de malezas, quedando cantidades excedentes en el ambiente que pueden causar efectos tóxicos indeseables en la biota. El hombre, aún sin ser su blanco directo, se encuentra en riesgo de exposición al glifosato. Debido a que no se conoce en profundidad el mecanismo de toxicidad a nivel molecular, el objetivo de este trabajo es evaluar los posibles efectos nocivos y el riesgo que implica la exposición con glifosato para el hombre. Se estudió la toxicidad del glifosato en un modelo in vitro de células humanas (HepG2). Las células fueron crecidas en medio mínimo esencial (MEM) suplementado con suero fetal bovino (SFB) 10 % (v/v), penicilina (100 U/ml), estreptomicina (100 mg/ml), anfotericina B (2,5 mg/ml). Las células fueron crecidas en ambiente húmedo con CO2 al 5 % (v/v), a 37 ºC y se renovó el medio dos veces por semana. Para todos los experimentos, las células en monocapa fueron levantadas con 0,25 % de tripsina estéril, diluidas con MEM/SFB 10% y resembradas en placas de 96 pocillos (0,2 ml; 2 x104 células/pocillo) para el ensayo de MTT (parámetro de viabilidad celular), en placas de 6 pocillos (3 ml; 3 x 105 células/pocillo) para el ensayo de actividad de caspasa 3/7 y para la determinación de peroxidación lipídica (sustancias reactivas al ácido tiobarbiturico, TBARs). Se midió la citotoxicidad (CL50) de la formulación de glifosato Atanor® con y sin el agregado del coadyuvante Impacto®, de la formulación Roundup®, el glifosato grado técnico en su forma ácida y su principal metabolito, AMPA, sobre la línea celular HepG2. Todos los parámetros se midieron en concentraciones sub-agrícolas de todos los compuestos. Se determinó la CL50 a 24, 48 y 72 hs para todos los compuestos: 41,2 (37,6-45,1), 35,2 (34,9-35,4), 34,7 (34,1-35,3) mg/L para Roundup®; 93,9 (75,0-117,4), 40,4 (31,2-52,2), 29,9 (17,8-50,4) mg/L para Atanor® más Impacto®; 445,7 (416,4-477,1), 418,7 (405,1-432,8), 383,5 (372,8-394,4) mg/L para Atanor® y 14,3 (11,8-17,7), 3,5 (3,1-3,9), 2,3 (2,2-2,4) mg/L para Impacto®. No se observó un efecto significativo a dosis sub-agrícolas tanto del glifosato ácido como del AMPA. Se realizó el estudio de toxicidad conjunta, por el método de Marking, para evaluar la interacción entre Atanor® e Impacto® en la mezcla usada en agricultura a 24, 48 y 72 hs de exposición. Los resultados indicaron un efecto sinergístico en la toxicidad en todos los casos. Se encontró un aumento significativo (hasta un 240%) en la actividad de caspasas 3/7 en el tratamiento con Roundup® (35 mg / L) luego de 24 horas de exposición. Sin embargo no se observaron diferencias significativas en los niveles de TBARs para ninguno de los tratamientos ensayados (CL80 de cada uno de los compuestos). Se concluye que los efectos de citotoxicidad y apoptosis encontrados podrían ser más dependientes de las formulaciones que de la concentración de glifosato en si.