Los huevos de los caracoles manzana son la caja de Pandora: ¿Una nueva hemoproteína en el reino animal?

M. Y. PASQUEVICH; I. PAVÍA; L. BAUZÁ; G. I. BENÍTEZ; H. HERAS

Santa Clara del MAR

Taller; 7mo Taller POMACEA "Biología de Ampullariidae"; 2023

Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata

Los moluscos gasterópodos son un grupo muy diverso de invertebrados cuyas proteínas ypigmentos de sus huevos han sido, con algunas excepciones, poco investigadas. Los estudiosproteómicos han demostrado que los huevos de los caracoles manzana (Pomacea sp.) tienen másde 30 proteínas, de las cuales más del 50% son desconocidas y/o no caracterizadas. Nuestro grupoestá centrado en clasificar, identificar y estudiar la estructura, funciones y evolución de estasproteínas desconocidas. Los huevos que oviponen fuera del agua son muy llamativos y reflejandiferente coloración abarcando una amplia gama de colores. Esta diferente pigmentación los haceun modelo ideal para investigar estrategias filogenéticas de coloración en animales. En este trabajoaislamos y caracterizamos una proteína de Pomacea maculata, presente en Pomacea canaliculata,pero no las especies del clado Bridgesii, de color amarillo que se encuentra en la fracción PV3 delos huevos. La proteína, en adelante denominada PmaHP, se purificó combinando centrifugacióndiferencial, ultracentrifugación en gradiente de densidad, y HPLC. Luego se estudió PmaHPmediante espectrofotometría UV-VIS, electroforesis y espectrometría de masas. Su secuencia secomparó con homólogos de otros moluscos y se predijeron bioinformaticamente posibles sitios deunión al pigmento. El espectro de absorción es típico de las metaloporfirinas y el análisis ICP-MSreveló que el metal es hierro. La metaloproteína presenta características de proteínas básicas y espositiva para tinción de hemo con TMB. Posee un PM de 18,2 kDa y se identificó por Espectrometríade Masas la secuencia completa de aminoácidos. La similitud de secuencia con otras proteínashomólogas de moluscos es del 48-52% y la estructura tridimensional contiene tres potenciales sitiosde unión para el grupo hemo. Un suero anti-PmaHP reaccionó cruzadamente con una proteína demayor peso molecular presente en el huevo, lo que sugiere que proviene de un precursor de mayortamaño. Describimos la presencia de un pigmento no antes reportado en los huevos de Pomacea,que forma una hemoproteína soluble, extracelular, sin homología de secuencia con hemoproteínasdel reino animal y cuyas homólogas no presentan estos potenciales sitios de unión al hemo. Hastael momento solo estaban descriptos en los huevos de Pomacea pigmentos exógenos, provenientesde la dieta. La presencia de pigmentos endógenos en los huevos de Pomacea pone de manifiestoel aumento de complejidad en el color de los huevos en las especies del linaje más derivado. Eneste trabajo aportamos información sobre la estructura de una hemoproteína aun no reportada enel reino animal.