EVALUACIÓN IN VITRO DE LA ACTIVIDAD ANTIBIOFILM DE CIPROFLOXACINA, LIDOCAINA Y GLICERINA EN CEPAS DE IMPORTANCIA CLINICA

BARBIERI, FIAMMA; BECERRA, MARÍA CECILIA; OLIVERA, MARÍA EUGENIA

Conferencia; SIMPOSIO IBEROAMERICANO COIFFA 2022; 2022

INTRODUCCIÓN: Las infecciones crónicas de heridas de la piel se caracterizan por un retraso en el proceso de curación, con implicaciones clínicas como aumento del dolor, y una carga significativa para el sistema de salud (Falcone, 2021). La cronicidad de las heridas se asocia a la presencia de biofilms bacterianos, los cuales están presentes en el 70% de las heridas crónicas, siendo las especies predominantes pertenecientes a los géneros Pseudomonas y Staphylococcus (Edwards, 2004). Estas estructuras representan una forma de protección de las bacterias frente al sistema inmune y los agentes antimicrobianos: dentro del biofilm, son 50 a 1000 veces más resistentes a los antibióticos que sus formas planctónicas o libres (Rahim, 2017). El tratamiento eficaz de una infección asociada a biofilms requiere una concentración alta y sostenida de antimicrobiano tanto en el sitio de infección como dentro del biofilm, situación difícil de lograr con tratamientos sistémicos. En este sentido, la vía tópica permite dirigir los fármacos al blanco de acción y aumentar su concentración en el sitio de infección, siendo una opción atractiva siempre que se logre una liberación local sostenida (Dumville, 2017). Las membranas bioadhesivas son una opción ventajosa para el tratamiento tópico de heridas ya que presentan características beneficiosas como la administración no invasiva, su trasparencia, la facilidad de manipulación y el desarrollo rentable (Bassi, 2017). Las mismas se elaboran a partir de una mezcla de polímeros con los principios activos seleccionados y con el agregado de plastificantes que favorecen la transparencia final de la formulación. De esta manera, se han elaborado membranas conteniendo Ciprofloxacina (Cip), Lidocaína (Lid) y Glicerina (Gli) como plastificante (Olivera-Sánchez, 2019). En este contexto, se propuso evaluar la actividad antibiofilm de Cip, Lid y Gli solos y en combinación frente a cepas de relevancia clínica, como componentes de una nueva formulación para la vía tópica que permita erradicar biofilms de heridas infectadas. METODOLOGÍA: Se seleccionaron dos cepas clínicas altamente formadoras de biofilms, Staphylococcus aureus meticilino-resistente 9455 y Pseudomonas aeruginosa 19115. La formación de los biofilms se realizó a partir de cultivos frescos en caldo glucosado al 0,25% p/v para obtener una concentración final de 106 UFC/mL. Se colocaron 150 µL de la suspensión bacteriana a cada pocillo de una placa estéril de 96 wells y se incubó por 24 horas a 37°C. Posteriormente se descartó el sobrenadante y se lavó cada pocillo con PBS. Una vez formado el biofilm, se agregaron 50 µL de cada tratamiento y la combinación de los tres componentes en idénticas concentraciones (CipLidGli). Como control se utilizó el biofilm formado sin tratar. Se dejó actuar por 24 horas incubando a 37°C y posteriormente se eliminó lavó 2 veces con PBS y se introdujo la placa en estufa de cultivo para su secado. Se realizó la tinción con solución de cristal violeta (CV) al 1% a cada pocillo y se dejó reposar por 15 minutos (Martínez, 2016). Se lavó el exceso de CV y se disolvió el colorante remanente en etanol 96% durante 15 minutos. Finalmente, se realizó una dilución 1/10 de cada pocillo muestra y se midió la absorbancia a 595 nm. RESULTADOS: La Tabla 1 y la Figura 1 muestran que el tratamiento con Cip, Lid y Gli genera una reducción significativa de la masa de biofilm en ambas cepas, tanto cuando se usan en forma individual como combinada. Es importante destacar que, si bien se ha descripto la disrupción de biofilms para Cip en las cepas evaluadas (Roauf, 2021; Kashef, 2020), así como la actividad antibacteriana de Lid frente a varias cepas (Kesici, 2019; Johnson, 2008), no hay reportes previos que den cuenta de la capaciad de Lid o Gli de disrumpir biofilms formados, lo que representaría un aspecto novedoso y beneficioso adicional a su función como anestésico local y plastificante de la membrana, respectivamente. El tratamiento con CipLidGli mantiene la capacidad de disrupción, lo que sugiere que su combinación sería al menos tan efectiva en la erradicación de biofilms como los tratamientos en forma individual.CONCLUSIONES. Cip, Lid y Gli mostraron disrupción de biofilm frente a ambas cepas, tanto en forma individual como combinada. Es así que la utilización tópica de estos componentes para tratar heridas infectadas favorecería el efecto de la formulación en la erradicación de biofilms. En este sentido, sería relevante complementar los resultados obtenidos con ensayos de tinción diferencial LIVE/DEAD o naranja de acridina y posterior obtención de imágenes con microscopio confocal (CLSM) o microscopia de barrido (SEM) para evaluar la viabilidad celular en los biofilms expuestos a éstos tratamientos.