Caracterización de un anticuerpo monoclonal específico para Anaplasma marginale

BELLEZZE J ; VALENTINI B.S; BOSIO A.S; AMHERDT P.A; THOMPSON C.S.; PRIMO M.E.

Santa Fe

Congreso; XV Reunión Anual de Inmunología Veterinaria y III Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria; 2023

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

La aparición de brotes de anaplasmosis bovina, causadas por Anaplasma marginale, en zonas no endémicas ha incrementado el uso de la vacunación con Anaplasma centrale. Para la identificación de portadores de A. marginale se utilizan técnicas serológicas basadas en la detección de anticuerpos contra la proteína MSP5 de A. marginale (MSP5m). MSP5m presenta 91,5% de identidad con MSP5 de A. centrale (MSP5c). Los ELISAs que utilizan MSP5m como antígeno no pueden diferenciar animales vacunados de infectados. El objetivo del trabajo fue producir y caracterizar un anticuerpo monoclonal (AcM) específico para MSP5m. Ratones Balb/c se inocularon con MSP5m recombinante, se seleccionó el hibridoma productor del AcM6 que reconoce MSP5m pero no MSP5c y se cultivó en medio Ex-Cell® 610-HSF. AcM6 se purificó por afinidad con proteína G-sepharose a partir de 500 mL de sobrenadante. Se determinó la concentración midiendo la absorbancia a 280 nm, el isotipo con el kit de ELISA de Isotipificación (BD Pharmingen™) y la constante de afinidad en solución por ELISA. La región de MSP5m reconocida por AcM6 se evaluó usando quimeras MSP5m/MSP5c por ELISA indirecto y Western Blot. La presencia de anticuerpos en 41 muestras de sueros bovinos infectados con A. marginale dirigidos contra el mismo epitope que AcM6 se evaluó por ELISA de competición (ELISAc) usando MSP5c para bloquear los anticuerpos dirigidos contra regiones conservadas entre ambas moléculas. El rendimiento fue 250 µg, el isotipo IgG1κ, la constante de afinidad 2x10-7 M y el epitope reconocido se ubicó entre los residuos 87-146. Se detectaron anticuerpos capaces de inhibir la unión de AcM6 a MSP5m en todas las muestras, indicando que AcM6 reconoce un epitope inmunodominante. La obtención de un AcM que identifica un epitope específico e inmunodominante de MSP5m es una herramienta prometedora para el desarrollo de ELISAs específicos para A. marginale.