Anticuerpos bovinos anti-p34 de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: diagnóstico temprano y funcionalidad

FERNÁNDEZ, B; JOLLY, A; COLAVECCHIA, SB.; STEMPLER, A; FORTUNY, M. L.; PAOLICCHI, F.A.; MUNDO, S. L.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y Reunión Anual de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis (SLAMTB); 2016

Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis (SLAMTB)

La paratuberculosis es una patología granulomatosa crónica intestinal que afecta a rumiantes y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Entre sus proteínas inmunodominantes, se encuentran la p34 carboxi-terminal (p34cx).El objetivo del trabajo fue evaluar si los anticuerpos (Acs) bovinos específicos frente a p34cx son útiles con fines diagnósticos en estadios de infección temprana y si afectan la viabilidad intracelular de Map en macrófagos. La p34cx recombinante (p34r) se expresó en E. coli BL21 pLysS transformadas con el plásmido p34-pRSET A y se purificó por cromatografía de afinidad a níquel.Siete terneros holando-argentino machos de 7 semanas de edad fueron infectados dos días consecutivos vía oral con los aislamientos de Map A y C (250 mg totales, peso húmedo). Los grupos experimentales fueron: infectados con A (A, n=3), infectados con C (C, n=2) y controles no infectados (CN, n=2). Se evaluaron los niveles de IgG, IgG1 e IgG2 específicos frente a p34r durante 180 días por la metodología de ELISA.Para estudiar la funcionalidad de los Ac anti-p34 en la fagocitosis de Map, se utilizaron sueros provenientes de bovinos inmunizados con p34r (Ip34r, n=2), infectados clínicos (IC, n=2), y controles negativos (CN, n=2). Macrófagos bovinos (línea BoMac) fueron infectados con Map ATCC 19698 (multiplicidad de infección de 1:1) pre-tratadas con Ac purificados (por afinidad a proteína G) de los grupos Ip34r, IC o CN. Los resultados se expresan como % de viabilidad para cada tratamiento: unidades formadoras de colonias (UFC) a las 72hs de infección / UFC a las 2hs de infección * 100. Se realizó un ensayo control de bloqueo de los receptores de la fracción cristalizable de los Acs (RFc) utilizando Acs bovinos irrelevantes agregados por calor.Se identificó que sólo 2 de los 3 terneros del grupo A presentaron Acs específicos frente a p34r y el isotipo que predominó fue IgG2. Mientras que, los terneros infectados con el aislamiento C y CN resultaron negativos durante todo el periodo estudiado.El pre-tratamiento de Map con Acs de animales inmunizados con p34r, disminuyó significativamente la viabilidad intracelular de Map a un 56%, mientras que el descenso en la viabilidad fue de 74 y 80% cuando las bacterias se pre-trataron con Acs de bovinos infectados clínicos y CN, respectivamente (p=0,001). Este efecto se revirtió cuando se bloqueó el RFc sobre los macrófagos (90%). Este trabajo demuestra que la identificación de anticuerpos específicos frente a p34r no permite mejorar el diagnóstico serológico de la paratuberculosis en estadios tempranos. Mientras que, los anticuerpos bovinos específicos a p34r obtenidos por inmunización disminuyen la viabilidad intracelular de Map en un modelo de infección de macrófagos bovinos. Este hallazgo aporta nuevas evidencias que sostienen que los anticuerpos poseen un papel activo en la infección y justifican la continuación de su estudio en modelos de infección y protección en la especie bovina.