Papel de anticuerpos en la viabilidad intracelular de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en macrófagos bovinos

FERNÁNDEZ, B.; JOLLY, A; COLAVECCHIA, SB.; STEMPLER, A; FORTUNY, M. L.; MUNDO, S. L.

Buenos Aires

Jornada; IV Jornadas de Jóvenes investigadores en Ciencias Veterinarias, Facultad de Ciencias Veterinarias de la UBA; 2014

Facultad de Cs Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires

La paratuberculosis es una patología granulomatosa crónica intestinal que afecta a los rumiantes y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Entre las proteínas inmunodominantes del Map, se encuentran la p34cx y la proteína de shock térmico de 65 kDa (Hsp65). El objetivo del presente trabajo fue evaluar el papel de anticuerpos (Ac) bovinos en la viabilidad intracelular de Map en un modelo de infección de macrófagos bovinos in vitro. Los sueros provenientes de bovinos infectados clínicos (IC, n=2), inmunizados con Hsp65 (IHsp65, n = 2), inmunizados con p34cx (Ip34cx, n=2) y controles negativos (CN, n=2) fueron evaluados por ELISA a fin de determinar la reactividad de sus Ac frente a Map (bacteria entera), Hsp65 y p34cx. Macrófagos bovinos (línea BoMac, 2X105 células viables/hoyo) fueron infectados con Map ATCC 19698 (2,5X105 UFC/hoyo) pre-tratadas con los Ac purificados de IC, IHsp65, Ip34cx o CN (20µg/hoyo). La sobrevida de las bacterias se evaluó por el porcentaje de viabilidad intracelular (PVI) a las 72 hs de infección: UFC72hs / UFC0hs *100. Como control se realizó un experimento de bloqueo del receptor para Fc (RFc) a fin de corroborar el papel de los Ac. Se detectaron altos niveles de IgG específicos a Map en sueros de los bovinos infectados naturalmente. Se hallaron Ac Hsp65-específicos solamente en sueros de los IHsp65. Mientras que, se identificaron Ac p34cx-específicos en sueros de los Ip34cx e IC. Se detectó una disminución estadísticamente significativa (p = 0,001) en la viabilidad intracelular de Map cuando se realizó el pre-tratamiento con Ac provenientes de animales inmunizados con p34cx (Ip34cx). Además, al bloquear el RFc, el efecto fue inhibido (56% PVI sin bloquear vs 90% PVI bloqueado). Mientras que, no se detectaron variaciones en el resto de los tratamientos. Estos resultados indicarían que los anticuerpos anti-p34cx disminuyen la viabilidad bacteriana dentro de los macrófagos en la infección in vitro. Este hallazgo sustenta futuras investigaciones a fin de evaluar el efecto de los anticuerpos anti-p34cx en modelos de infección in vivo.