ANTICUERPOS MONOCLONALES ASOCIADOS A NANOPARTÍCULAS EN LA IDENTIFICACIÓN DE MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS EN LECHE

BASS, L; GILARDONI, L.; JOLLY, A; FERNÁNDEZ, B.; GOLDMAN, L.; COLAVECCHIA, S; MUNDO, S

CABA

Jornada; I Jornada de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias; 2011

Facultad de Ciencias. Veterinarias, UBA

La Paratuberculosis es una enfermedad granulomatosa crónica que afecta a los rumiantes y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Esta bacteria se ha relacionado con la enfermedad de Crohn en humanos. El objetivo fue utilizar anticuerpos monoclonales (Acm) para la detección de Map en leche contaminada. Se analizaron 48 hibridomas utilizando Map y la proteína p34 como antígenos. Éstos fueron evaluados por ELISA. Se identificó la línea 3B3 como alta productora de anticuerpos específicos. Se aislaron los Acm3B3 a partir de líquido ascítico por precipitación salina. Se evaluaron las reacciones del Acm3B3 frente a Map, Mycobacterium phlei, E. coli y Rodococcus sp y otros antígenos utilizados para el diagnóstico (PPA y LAM). Se determinó que reacciona frente a Map con altos valores de DO, sin detectar reacciones cruzadas. Se contaminó leche comercial con 105 a 101 de Map/ml. Se utilizaron nanopartículas imantadas unidas a un anticuerpo anti-ratón (Biolabs, Inc.), previamente sensibilizadas con 2,8 µg de Acm3B3 por cada 3,65 x 107 partículas. Los Map captados se identificaron por PCR, utilizando como blanco dos secuencias de la inserción IS900 (IS1 de 155 bp e IS2 de 94 bp). La lectura se realizó en geles de poliacrilamida. Utilizando esta metodología se logró detectar hasta 104 Map/ml con IS1 e IS2 y hasta 101 Map/ml con IS2. Se demostró que la utilización de Acm3B3 adosado a nanopartículas permite identificar Map en leche. La principal ventaja es la posibilidad de concentrar el material bacteriano y evitar la interferencia de los factores inhibidores de la PCR descriptos en leche.