Respuesta inmune humoral en bovinos infectados con Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

FERNÁNDEZ, B.; GILARDONI, L.R.; JOLLY, A; COLAVECCHIA, SB.; PAOLICCHI, F.A.; MUNDO, S. L.

Esperanza

Jornada; XII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas, Fac. Cs. Veterinarias, UNR - Jornada Nac. de Divulgación Técnico Científica 2011; 2011

Fac. Cs. Veterinarias, UNR y UNL

La Paratuberculosis es una patología crónica intestinal que afecta a los rumiantes y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). La infección se produce por ingestión de calostro, leche o materia fecal de animales eliminadores de bacterias. Los bovinos infectados atraviesan un largo periodo asintomático, en el que eliminan Map por heces y leche en forma intermitente. La identificación de estos animales es dificultosa. En algunos casos, luego de años de incubación, la patología avanza hacia el período sintomático, que se caracteriza por la aparición de los signos clásicos de la enfermedad, que son diarrea profusa con pérdida de proteínas y mala absorción de nutrientes. El desarrollo de la signología está acompañado de un cambio de perfil de la respuesta inmune de celular a humoral, por lo que el aumento de inmunoglobulinas (Igs) circulantes facilita el diagnóstico serológico. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la respuesta inmune humoral de bovinos provenientes de rodeos infectados con Map a fin de mejorar el diagnostico de los animales en estadio asintomático. Se clasificaron 19 bovinos por: rodeo de origen infectado o no, signología, proteinemia, Igs específicas frente al Antígeno Protoplasmático de Map, aislamiento de Map de materias fecales (MFs) y su posterior identificación por el IS900-PCR, e identificación de Map en leches por IS900-PCR. Los grupos de animales fueron: Controles (C, n=4); Infectados con Map (I, n= 15): en estadio Asintomático (IA, n=7) y Sintomáticos (IS) en estadio inicial (ISi, n= 4) y terminal (ISt, n=4). Se determinaron los niveles de isotipos de Igs (M, G, G1, G2, G3 y A) específicos frente a la cepa Map K10 en sueros y MFs por ELISA. Los resultados fueron transformados en logaritmos naturales y analizados por ANOVA y Test de Tukey (p< 0,05). Los niveles de Igs específicas a Map en sueros se muestran en la tabla. Grupo IgG (DO) IgG1 (g/mL) IgG2 (g/mL) IgG3 (ng/mL) C 0,15 ± 0,05 22,16 ± 4,96 0,63 ± 0,39 16,25 ± 2,99 IAi 0,15 ± 0,01 22,52 ± 1,91 2,96 ± 0,77 26,77± 10,39 IAa 0,66 ± 0,09* 107,91 ± 76,14* 8,76 ± 10,99* 32,85 ± 7,34* ISi 1,42 ± 0,63* 552,69 ± 416,62* 10,62 ± 10,74* 41,47 ± 18,83* ISt 1,14 ± 0,26* 458,62 ± 223,56* 24,42 ± 40,06* 57,62 ± 27,82* Se detectaron dos niveles de IgG específicas dentro del grupo de animales asintomáticos por lo que se decidió conformar subgrupos: el inicial (IAi, n= 3) y el avanzado (IAa, n= 4). Se detectaron incrementos significativos en IgG, IgG1, IgG2 e IgG3 específicas en sueros de los bovinos IAa, ISi e ISt en relación al grupo C. La IgG1 fue el isotipo predominante en estos grupos. En forma distintiva, no pudo detectarse IgG1 específica en el grupo IAi, el que se caracterizó por mostrar concentraciones superiores de IgG2 e IgG3 específicas a Map con respecto al grupo control (4,7 y 1,6 veces, respectivamente). Los estudios de isotipos en MF permitieron detectar sólo incrementos de IgG3 en los grupos IAa e ISi. No se detectaron diferencias en los niveles de IgM e IgA específicas a Map en sueros y materias fecales entre los grupos de bovinos estudiados. El ELISA-Map IgG desarrollado en este estudio permitió identificar la infección de los animales sintomáticos y asintomáticos. Sin embargo, un grupo de animales asintomáticos quedó excluido arrojando valores similares a los animales controles. Es de destacar que la utilización del ELISA con anti-isotipos IgG2 e IgG3 bovinos permitió su identificación incorporándolos como grupo de animales asintomáticos iniciales. Pudimos observar que los niveles de IgG sérica específicas aumentaron al avanzar la patología (IAi, IAa, ISi e ISt). La IgG1, como isotipo predominante en bovinos con Paratuberculosis sintomática, coincide con la descripción realizada por otros autores2. Nuestros resultados muestran incrementos de IgG1 e IgG2 específicas a Map, a medida que avanza la patología. Estes y Brown (2002)1, afirmaron que las respuestas inmunes de perfil T helper 1 (primera etapa de la patología) se caracteriza por la síntesis de IFNγ y la producción de IgG2, mientras que en las respuestas de tipo T helper 2 (segunda etapa de la patología) se caracterizan por la síntesis de IL-4 e IgG1. En nuestro estudio, los animales asintomáticos en estadio avanzado, ya han cambiado su respuesta al perfil T helper 2, ya que predomina la IgG1. Mientras que, los estudios de los niveles de IgG3 son escasos2, en nuestro trabajo se detectó su producción en etapas temprana de la enfermedad. A pesar de que la IgG1 es considerada como la Ig de mucosas en la especie bovina, sólo hemos detectado incrementos de IgG3 en MFs de animales infectados asintomáticos en estadio avanzado y sintomáticos iniciales. La falla en la detección de IgG3 en bovinos en estadios terminales posiblemente se deba a la baja concentración ocasionada por la diarrea. A nuestro entender, este es el primer trabajo que caracteriza la respuesta inmune humoral en excreciones de bovinos infectados con Map. En este estudio el número de animales es aún escaso, hecho relacionado principalmente con la dificultades de la confirmación del diagnostico y los pocos estudios sobre la prevalencia de la Paratuberculosis en nuestro país. Sin embargo, nuestros resultados sugieren que el estudio de IgG2 e IgG3 Map-específicas en sueros de animales asintomáticos permitiría mejorar su identificación. BIBLIOGRAFÍA 1. Estes, D.M.; Brown, W.C. Type 1 and type 2 responses in regulation of Ig isotype expression in cattle. Vet. Inmunol. and Inmunop. 90: 1-10. 2002. 2. Mundo, S.L.; Fontanals, A.M.; García, M.; Durrieu, M.; Álvarez, E.; Gentiline, E.; Hajos, S.E. Bovine IgG1 antibodies against Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis protein p34-cx improve association of bacteria and macrophages. Vet. Res. 39: 06. 2008.