Determinación rápida del perfil de alcaloides por UPLC-ESIMS/MS a partir de extractos hidroalcohólicos de hojas de Amarilidáceas

JAVIER E. ORTIZ; JAUME BASTIDA; GABRIELA E. FERESIN

San Juan

Congreso; XII CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2023

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE QUÍMICOS ANALÍTICOS

Las especies de la subfamilia Amaryllidoideae (Amaryllidaceae) está compuesta por 800especies y se caracterizan por producir de manera exclusiva una serie de alcaloidesbioactivos del tipo isoquinolínicos. Actualmente se han reportado más de 600 alcaloidesde Amarilidáceas1. Considerando la gran cantidad de estas especies en Argentina ySudamérica aún no estudiadas desde el punto de vista químico, es importanteestablecer métodos analíticos que permitan realizar el screening de alcaloides de unamanera eficiente, precisa y ecológica. El análisis por UPLC-MS/MS utilizando bibliotecasde espectros ha demostrado ser una herramienta útil aplicado al estudio de alcaloidesde las Amarilidáceas presentando notables ventajas respecto a GC-MS2,3. El objetivo deeste trabajo es la determinación rápida del perfil de alcaloides por UPLC-ESI-MS/MS através de un método extractivo rápido en medio hidroalcohólico ácido utilizando las hojasde 3 Amarilidáceas con el fin de hacer más eficiente el proceso de screening dealcaloides. 10g de hojas frescas y molidas de Hippeastrum escoipense, H. reticulatum yH. argentinum se colocan en frascos con 25mL de Ac.fórmico 1%:MeOH, 9:1. Losfrascos se sonicaron por 1hora a 35ºC, se filtraron los extractos por papel de filtro y 1mLde cada extracto se pasó a través de cartuchos Welchrome C18 de 3mL y luego porfiltro de Nylon 0,22µm para su inyección. Extractos enriquecidos en alcaloides de estasespecies fueron también analizados. Se usó un equipo UPLC Waters Aqcuity H-classXevo TQ-S micro ESI – QQQ con columna Acquity BEH C18, 1.7 µm, 2.1 mm x 100mm. Fase móvil compuesta por Ac.Fórmico 0,1%(A), ACN(B) y MeOH(C) en gradiente(%): 95:5(A:B) 0-5min; 85:15(A:B) 5-10min; 80:10:10(A:B:C) 10-17min; 95:5(A:B)17-20min, flujo de 0.2mL/min y se inyectó 15µL en cada corrida. Los alcaloides fueronidentificados a través de ChromaLynx XS utilizando una biblioteca previamenteconstruida a partir de 40 patrones de alcaloides de Amarilidáceas. Los cromatogramasobtenidos resultan similares a los obtenidos de los extractos enriquecidos en alcaloidesde las mismas especies, mostrando en ambos casos los alcaloides mayoritarios. Lospicos nuevos observados y no presentes en los extractos enriquecidos perteneceríanen su mayoría a compuestos no alcaloídicos aunque se advierten 3 compuestos queserían de naturaleza alcaloidal. Los alcaloides licorina, montanina, haemantamina ygalantamina fueron identificados en los extractos hidroalcholicos obtenidos por estanueva técnica. En base al análisis de los patrones de fragmentación de los compuestos,se identificaron tentativamente alcaloides del tipo-montanina y homolycorina. Estatécnica representa una herramienta rápida y efectiva para el screening de alcaloides deAmarilidáceas como fuente de productos naturales bioactivos.