Detección de sideróforos en Burkholderia contaminans

ROCIÓ, ESQUIVEL; PABLO, MARTINA

Posadas

Simposio; 2º Simposio Municipal de Investigación, Extensión y Desarrollo Local; 2022

Agencia Universitaria, Municipalidad de Posadas.

La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva hereditaria. A nivel pulmonar la enfermedad lleva a la acumulación de un mucus espeso que crea un ambiente propicio para la colonización y desarrollo de microorganismos en el tracto respiratorio. Estas infecciones causan un progresivo deterioro de la función pulmonar produciendo en muchos casos la muerte prematura del paciente. Dadas las particularidades del pulmón de los pacientes FQ los patógenos se desarrollan en su mayoría en forma de biofil ms. Una de las principales características de losbiofilms es la presencia de una matriz extracelular que protege a las bacterias de la acción de anticuerpos, del ataque de células fagocíticas y de los tratamientos antimicrobianos. Entre las especies bacterianas capaces de generar infecciones pulmonares se encuentran Burkholderia contaminans, una especie miembro del Complejo Burkholderia cepacia, que en nuestro país presenta la más alta prevalencia de este grupo y ha sido aislada en muestrade esputo de pacientes FQ y no FQ, así como también en instrumental hospitalario y como contaminante de productos industriales. Se ha demostrado en varias especies bacterianas queel hierro juega un importante rol en la capacidad de las mismaspara formar biofilm. El hierro, que es esencial para la vida bacteriana, no está libremente disponible y en muchos ambientesestá presente por debajo de la concentración requerida para el crecimiento bacteriano (10-6 a 10-8 M). Las bacterias han establecido un sistema para adquirir hierro, produciendo pequeñasmoléculas solubles, sideróforos, que secuestran hierro en el medio ambiente, y lo transportan a las células mediante la unión a receptores específicos en la superficie celular.Nuestra hipótesis de trabajo basada en resultados reportadospara Pseudomonas aeruginosa y B. cenocepacia, es que B. contaminans adopta respuestas adaptativas a las condiciones impuestas por el entorno para persistir en su hospedador, siendo una de ellas la producción de biofilm. Se sabe que la expresión de sideróforos es un elemento clave para la producción de biofilm. Para la primera etapa de nuestro estudio, el objetivo consintió en ponera punto un método para detección de la expresión de sideróforosen condición de limitación de hierro.Se emplearon cepas de B. contaminans recuperadas del esputode pacientes FQ con infección crónica, depositadas en el cepario del laboratorio GIGA. La detección de la expresión de sideróforos, fue realizado por el método universal Complejo ternariocromo-azurol S/hierro(III)/hexadeciltrimetilamonio-bromuro(CAS). La presencia de sideróforos produce un cambio en la coloración, de azul a naranja, por efecto del secuestro del hierrodel reactivo. Se realizaron cultivos en placas con medio M9-agar,limitados en hierro y suplementado con Cas-aminoácidos 10%,glucosa 20% y CAS. El pH 6.9 se mantuvo con PIPES. En las placas la presencia de halos de color naranja alrededor de las colonias fue considerada indicativos de sideróforos.Los resultados sugieren que la capacidad para producir sideróforos es esencial para el crecimiento celular eficiente. Encondiciones de limitación de hierro se observo que solo la mitad de las cepas de B. contaminans estudiadas fueron capaces deexpresar sideróforos. Estudios posteriores son necesarios paradeterminar el nivel de expresión y la naturaleza química de lossideróforos expresados.