Efecto modulador de Morin (3,5,7,2’,4’-pentahidroxiflavona) sobre las especies reactivas de oxígeno durante la maduración in vitro de ovocitos porcinos

GHERSA, J; LORENZO, MS.; CAROU, MC.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; VI Jornadas Internacionales Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal INITRA; 2021

El balance redox intra y extracelular en los ovocitos porcinos modula la eficacia de la maduración in vitro (MIV). Morin (3,5,7,2’,4’-pentahidroxiflavona) es un flavonoide de la familia de las flavonas que tienen efecto sobre la producción de radicales libres. Estudios recientes demostraron que, a altas concentraciones, Morín estimula la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) en células tumorales, mientras que a bajas concentraciones y en células bien diferenciadas, las elimina. Trabajos previos, demostraron que altas concentraciones de Morin (50 y 100 μM) disminuyen la maduración in vitro de ovocitos porcinos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del agregado de distintas concentraciones de Morin en el medio de maduración in vitro sobre la producción de ERO en ovocitos porcinos. Se obtuvieron complejos cumulus ovocito (COC) por aspiración folicular de ovarios a 30-37°C provenientes de cerdas faenadas en frigorífico. Se realizaron sucesivos lavados de los COC en PBS con 10% de fluido folicular porcino (FFp). Se maduraron los COC (50 COC por pocillo en 500 μL de medio) en medio 199 (M5017 Sigma®) con 10 % FFp y durante las primeras 22 h suplementado con hMG y AMPc (a 39°C en una atmósferasaturada de humedad, con 5 % de CO2). Se aplicaron 3 tratamientos: al medio base de maduración se agregó 50 μM, 10 μM y 5 μM de Morín. Luego de la MIV se denudaron los ovocitos con hialuronidasa y se incubaron con 153 μM de 2ʼ7ʼ-diacetato de diclorodihidrofluoresceina (DCH-FDA) a 37°C. Se observaron los ovocitos bajo microscopio de fluorescencia y se determinó la intensidad de la emisión del fluorósforo por la variable transmitancia. Se comparó la transmitancia promedio para cada uno de los grupos experimentales y se realizó un ANOVA no paramétrico (Kruskal- Wallis) seguido por una prueba de Dunn. Se utilizó un p-valor < 0,05. El agregado de Morín al medio base disminuyó significativamente los niveles de ERO en los ovocitos con respecto al control (82,56 ± 4,8, n=107 en el control; 57,94 ± 4,09, n=85; 62,72 ± 4,06, n=109 y 63,7 ± 3,78 n=111 en los tratamientos con 5, 10 y 50 μM de Morin, respectivamente). Sin embargo, no hubo diferencias significativas entre los distintos tratamientos. Si bien Morin generó una disminución en la producción de ERO en los ovocitos durante la MIV, las concentraciones más altasdemostraron previamente un efecto deletéreo sobre la maduración in vitro. Considerando estos resultados y los obtenidos en experimentos previos, se deberá continuar analizando los efectos del Morín para comprender su real mecanismo de acción.