Expresión de FliC131 para potenciar el efecto adyuvante de partículas derivadas de la pared de Lactococcus lactis

SILVESTRE D.; MORENO G.; ARGÜELLES M.H.; MANDILE M.G.; PERI IBAÑEZ E.S.; GLIKMANN G.; RUMBO M.; CASTELLO A.A.; TEMPRANA C.F.

Bernal, Buenos Aires

Simposio; IV Jornadas de Investigadores en Formación en Ciencia y Tecnología; 2021

Universidad Nacional de Quilmes

Aunque las vacunas tradicionales son indiscutiblemente un gran avance de la ciencia, actualmente se busca desarrollar alternativas vacunales más eficaces y seguras, sin patógenos con capacidad replicativa. En este contexto, Lactococcus lactis se ha estudiado como plataforma de delivery de antígenos. Recientemente, nuestro grupo logró expresar en L. lactis la proteína VP6 de rotavirus y exponerla en la superficie celular, pero dicho L. lactis recombinante administrado por vía de mucosas no indujo una respuesta humoral específica. En cambio, cuando se administraron partículas derivadas de la pared (CWDP) de los mismos L. lactis recombinantes por vía intranasal sí se obtuvo una respuesta inmune específica anti-rotavirus. Sin embargo, la misma solo confirió protección frente a la infección cuando se coadministró un adyuvante.La flagelina, proteína que conforma los flagelos bacterianos, ha sido propuesta como un adyuvante de mucosas dada su capacidad para activar receptores del sistema inmune como el TLR5. En particular, una variante de deleción de la flagelina de Salmonella enterica serovar Typhimurium (FliC131) ha demostrado conservar las propiedades adyuvantes, pero logrando ser menos antigénica. Esto evitaría la generación de anticuerpos anti-flagelina que podrían interferir en su capacidad adyuvante cuando se administra en dosis repetidas.El objetivo del presente proyecto fue expresar FliC131 en L. lactis para aumentar el potencial inmunogénico de las CWDP. Primero, se estudió la presencia de la proteína recombinante en las CWDP-FliC mediante SDS-PAGE y Western blot. Luego se evaluó su capacidad para activar TLR5 in vitro utilizando la línea celular reportera Caco-CCL20-Luc, demostrando que CWDP-FliC activa TLR5 de forma dosis-dependiente. Finalmente, se analizó si FliC131 aumenta la inducción de fagocitosis mediante un ensayo in vitro con la línea de macrófagos J774. Para esto, se marcaron con FITC partículas derivadas de paredes de L. lactis NZ900 y CWDP-FliC. Los resultados mostraron que FliC131 no modifica los niveles basales de fagocitosis inducidos por las CWDP de L. lactis NZ9000.En conclusión, se lograron obtener CWDP de L. lactis que contienen FliC131 y activan TLR5 in vitro. A futuro, se planea evaluar y caracterizar su capacidad adyuvante en modelos in vivo de inmunización por vía de mucosas.