DESARROLLO DE METODOLOGÍA RÁPIDA DE DETECCIÓN DE ROTAVIRUS HUMANOS EN ESPECÍMENES CLÍNICOS

PERI IBAÑEZ E.S.; MANDILE M.G.; ARGÜELLES M.H; TEMPRANA C.F.; FLORES C.Y.; AGUIAR C.; GRASSELLI, M.; GLIKMANN G; CASTELLO A.A.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología (CAV2017); 2017

Asociación Argentina de Microbiología

Los rotavirus del grupo A (RVA) son el agente etiológico único más frecuentemente asociado a diarreas severas en niños pequeños causando más de 450.000 muertes de menores a 5 años globalmente antes de la introducción de la vacunación. Si bien las vacunas licenciadas han demostrado ser altamente efectivas en estudios clínicos realizados en países de medio a alto nivel de ingreso per cápita, su eficacia y eficiencia en regiones de bajos ingresos y pobres condiciones socio-sanitarias muestran menores rendimientos. El objetivo del presente trabajo está encuadrado en un marco general de investigación sobre distintas opciones de metodología rápida de diagnóstico. En particular el desarrollo de un método rápido para RVA factible de ser utilizado sin equipamiento y por personal sin entrenamiento es de gran interés para evaluar el impacto de la vacunación en zonas de bajo nivel socio-económico del conurbano bonaerense. Dicha evaluación es relevante por las observaciones antedichas sobre el rendimiento subóptimo de la protección en las mencionadas condiciones epidemiológicas y forma parte de un proyecto de desarrollo tecnológico y social (PDTS).Se evaluaron técnicas rápidas de aglutinación de partículas de látex (APL) provistas por el Grupo de Polímeros del INTEC/UNL/CONICET de Santa Fe, técnicas de flujo a través de membranas de poros perfectos (FT, flow through) desarrolladas por LAMABIO/UNQ e inmunocromatografía de flujo lateral (ICFL) sobre membranas de PVDF y Nitrocelulosa utilizando nanopartículas de oro producidas por el LAMABIO/UNQ. Se generaron y almacenaron lotes consistentes de cepas prototipo de RVA humano de dos grupos epidemiológicamente importantes, Wa y DS-1, para ser utilizados como material antigénico estándar. Se testearon distintas condiciones de reacción y reactantes modificando buffers, aditivos, preparaciones de anticuerpos y varias opciones de soportes de muestras y tipo de partículas para aglutinación y flujo lateral.En las pruebas de prototipos de APL, FT e ICFL con membranas de nitrocelulosa se obtuvieron resultados satisfactorios en cuanto a sensibilidad y especificidad con cepas de cultivo y un número de muestras clínicas. Sin embargo, dado el acceso limitado a membranas de poros perfectos y la pérdida de sensibilidad de la APL luego de dos meses de almacenamiento a 4°C, se optó por continuar con el desarrollo y validación de la ICFL sobre membrana de nitrocelulosa para la implementación de las futuras pruebas de campo. Nuestro ensayo ICFL demostró un 73 % de sensibilidad y 100 % de especificidad contra los métodos de detección de referencia sobre un panel de muestras clínicas, habiendo coincidido totalmente con un método similar de origen comercial. Si bien a nivel prototipo se alcanzan buenos desempeños, la producción a escala media requiere de una confección semiautomatizada del kit cuyo desarrollo está en curso.