REGULACIÓN DEL PROMOTOR 1 DE BCL-X POR EGF EN CÉLULAS EPITELIALES MAMARIAS HC11

ROMORINI, L.; GRINMAN, D; COSO OA; PECCI A

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunion Anual de SAIC; 2009

SAIC

EGF activa vías de señalización asociadas con la proliferación celular y la apoptosis. Hemos demostrado previamente que la regulación de los niveles proteicos y de ARNm de Bcl-XL (antiapoptótica) es fundamental en la inhibición de la apoptosis mediada por EGF en células epiteliales mamarias HC11, siendo PI3K/AKT la principal vía involucrada. En este trabajo estudiamos cuál/es de los cinco promotores y cuál/es factores de transcripción median la expresión de bcl-x por EGF. Se cuantificaron los niveles de los transcriptos generados a partir de los distintos promotores de bcl-x por RT-qPCR y se observó que sólo los niveles de los transcriptos provenientes del promotor 1 (P1) aumentan luego del tratamiento con EGF (2±0,1 veces vs. control). Esta inducción es bloqueada por LY294002, inhibidor de PI3K (1,1±0,01 veces vs. control). El análisis in sílico de la secuencia de P1 reveló la presencia de sitios de unión de los factores de transcripción AP1, ETS, NFKB, STAT5, CREB y C/EBP, todos ellos plausibles de ser activados por EGF. Se co-transfectaron células HC11 con un vector reportero pP1-Luc junto con vectores de expresión de AKT y los distintos factores mencionados. Se observó que AKT, Ets-2 y CREB activan a P1 (1,4±0,1; 1,8±0,1 y 3,5±0,2 veces vs. control, respectivamente). Conclusión: La activación de PI3K/AKT por EGF aumenta los niveles de bcl-x por regulación de P1, siendo CREB y/o Ets-2 posibles factores mediadores de este efecto.