Control de la expresión de Bcl-XL por el Factor de Crecimiento Epidermal (EGF) en células mamarias de ratón (HC11)

ROMORINI, L.; COSO, O.A.; PECCI, A.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; XLX Reunión Anual de SAIC; 2005

SAIC

La activación de las vías de señalización dependientes de EGF ha sido asociada al control de la proliferación celular y la apoptosis. La línea celular HC11 derivada de epitelio mamario de ratón es un modelo muy utilizado en el estudio in vitro de la proliferación y diferenciación de células mamarias. Datos bibliográficos muestran que EGF revierte la apoptosis de células HC11 confluentes y aumenta la expresión de Bcl-2 (proteína con función antiapoptótica). El gen bcl-X (de la familia de bcl-2) codifica para varias isoformas con funciones opuestas, i.e: Bcl-XL (antiapoptótica) y Bcl-XC (proapoptótica). El perfil de expresión de esas isoformas varía en las diferentes etapas de desarrollo del epitelio mamario. El objetivo de este trabajo es estudiar la regulación de la expresión de Bcl-X por EGF y los mecanismos de señalización involucrados en ese proceso. Se midieron los niveles de la proteína Bcl-XL por Western Blot en células HC11 confluentes luego de un tratamiento de 8 hs en presencia o ausencia de EGF (100 ng/ml). Los resultados mostraron que EGF aumenta 1,9 veces los niveles de Bcl-XL con respecto al control. Este aumento fue inhibido por los inhibidores de proteínas quinasas PD98059 (inhibidor de ERK) y SP (inhibidor de JNK), sugiriendo que ambas enzimas estarían involucradas en el control de la expresión de Bcl-XL. Luego se analizaron los niveles de los ARNms de Bcl-X mediante RT y Real Time PCR utilizando oligonucleótidos especifícos para cada una de las dos isoformas: bcl-XL y bcl-XC. Las células se trataron por 5hs en presencia o ausencia de EGF y/o los inhibidores de quinasas. Los niveles de cada una de las isoformas se cuantificaron y se calcularon los cambios en la relación bcl-XL/bcl-XC para cada tratamiento. Un aumento en esa relación indicaría una condición antiapoptótica y una disminución de la misma, una condición proapoptótica. Los resultados mostraron que EGF aumenta la relación bcl-XL/bcl-XC (23,1 veces vs. control). El inhibidor SP bloquea totalmente ese efecto, mientras que PD98059 lo hace sólo en forma parcial, sugiriendo un mayor compromiso de JNK en la mediación de la respuesta a EGF. Luego se analizó el grado de activación de ambas MAPKs por Western Blot contra las formas fosforiladas de las mismas. Los resultados mostraron que ambas quinasas son activadas de manera secuencial por EGF en este tipo celular. En conclusión: EGF aumenta la expresión de la proteína Bcl-XL y la relación bcl-XL/bcl-XC de los ARNm en células HC11 confluentes estando las proteínas ERK y JNK involucradas en ese proceso.