Neosporosis bovina: actualización, diagnóstico e interpretación de resultados

CAMPERO, L.M.

San Carlos de Bariloche

Jornada; Jornadas Patagónicas AAVLD; 2022

AAVLD

Neospora caninum es un protozoo apicomplexa que afecta al perro pudiendo generar signosneuromusculares y al ganado vacuno causando el aborto, principalmente entre el 5to-7mo mes de gestación.El bovino actúa como un hospedador intermediario por excelencia, siendo N. caninum uno de losmicroorganismos con mayor eficiencia de transmisión transplacentaria, con tasas de hasta 95 %. Distintosescenarios que pueden darse en una hembra bovina preñada infectada: aborto, nacimiento de un terneroasintomático pero congénitamente infectado y en menor proporción, terneros con signos neurológicos. Lapermanencia de crías clínicamente sanas pero congénitamente infectadas implica un riesgo ya que poseenmayor probabilidad de abortar o facilitar la persistencia de la enfermedad en el rodeo. Cantón et al. (2022)evaluaron la casuística del Servicio Diagnóstico Veterinario Especializado (SDVE) del INTA Balcarce, apartir de 1163 fetos abortados (1994-2019) procesados de la provincia de Buenos Aires. Los autoresconcluyeron que neosporosis es la primera causa de aborto de origen infeccioso en ganado lechero (17,3%) y la segunda en ganado para carne (7 %), ocasionando pérdidas económicas de 11 y 10 millones dedólares, respectivamente. A pesar de que la neosporosis tiene impacto en la industria ganadera generandograndes pérdidas económicas, aún no existen tratamientos quimioterapéuticos ni vacunas capaces de evitarel aborto y/o transmisión transplacentaria. Las medidas de control se sustentan en interrumpir el cicloparasitario, ya sea en su transmisión horizontal como vertical, previo a ello se debiera conocer cuál es laprincipal vía de transmisión (vertical u horizontal) que predomina en el rodeo en cuestión. La serología esuna técnica fundamental que evidencia la exposición parasitaria mediante la detección de anticuerposespecíficos. Complementariamente, es posible diferenciar infecciones agudas de crónicas mediante lamedición de la avidez (afinidad funcional) de los anticuerpos, siendo ésta baja en infecciones recientes yprogresivamente al evolucionar la respuesta inmune, los valores de avidez aumentan en infeccionescrónicas. Para tal fin, existen ELISAs de avidez que aportan valiosa información epidemiológica. Tambiénexisten desarrollos de tests diagnósticos locales descriptos como ELISAs indirecto pruebainmunoenzimática en línea (applied printing immunoassay -APIA-); y más recientemente, un ELISA decompetición aunque desafortunadamente no están disponibles comercialmente. Recientemente se describióuna prueba intradérmica de hipersensibilidad retardada para N. caninum, midiendo la respuesta inmunecelular en vaquillonas experimentalmente infectadas con niveles de anticuerpos no detectables. Laspruebas serológicas más difundidas en Argentina son la Inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el ELISAindirecto. La técnica de ELISA es más práctica para el diagnóstico de neosporosis bovina por suautomatización y lectura objetiva de los resultados. Un trabajo inter-laboratorial en anillo realizado entrelaboratorios de referencia en el diagnóstico de neosporosis bovina de Argentina, Brasil, Perú, México yEspaña, reportó gran variabilidad entre las pruebas serológicas evaluadas (IFI y ELISAs in-house ycomercial), sugiriendo que la implementación de un test comercial podría contribuir a armonizar eldiagnóstico y optimizar estrategias de control. No obstante, la participación periódica en programas decontrol diseñados con serotecas de referencia y la constante capacitación del personal técnico responsablede la ejecución y lectura de pruebas diagnósticas son fundamentales para asegurar un resultado confiable.Cuando un establecimiento registra episodios de aborto y sospecha de neosporosis como principal causade aborto se debiera proceder al sangrado no sólo de las vacas que abortaron sino también de compañerasgestantes. Un resultado individual positivo de una vaca que abortó no implica que N. caninum sea la causadel aborto. Vacas seropositivas pueden tener cría al pie sana pero ser congénitamente infectada. Laevaluación e interpretación de la serología de animales abortados y compañeras preñadas aporta evidenciaque justificaría o no la implementación de medidas de control, en caso de existir asociación estadística entreseropositividad y aborto. La implementación de medidas de control dependerá de la prevalencia de laenfermedad en el rodeo y de los valores productivos y económicos, siempre evaluando la relacióncosto/beneficio. Debido a la ausencia de un test de referencia (gold standard) para neosporosis y lasescasas posibilidades de un aislamiento exitoso, el diagnóstico de N. caninum como agente causal deaborto implica la aplicación de una batería de pruebas diagnósticas (histopatología, PCR y serología) y unavisión integrada de sus resultados para lograr una correcta interpretación de la relación causa-efecto. Demanera aislada, ninguna de las 3 pruebas mencionadas resulta concluyente respecto al rol de N. caninumLucía Campero. Lic. en Biología, Dra. Cs. Vet. Investigadora Asistente deCONICET. Integrante de Comisión Científica de Enfermedades Venéreas yNeosporosis de la AAVLD.23en el aborto. Asimismo, se debiera abordar el diagnóstico con conocimiento de la enfermedad(inmunopatogenia, respuesta del hospedador y comportamiento biológico parasitario) y de los fundamentosy características operativas de las pruebas diagnósticas aplicadas. Sólo así es posible brindar un resultadoconfiable y transferible a la resolución del problema que presenta un establecimiento. La detecciónmolecular de ADN de N. caninum en fetos abortados por PCR indica transmisión transplacentaria exitosa,aunque no necesariamente asociada a la presentación de abortos. El cerebro (refrigerado o congelado) esla muestra de elección para el diagnóstico molecular de N. caninum ya que posee mayor probabilidad dehallar ADN parasitario al tratarse del órgano diana donde se aloja este protozoo. En coincidencia, Collanteset al. (2006) demostraron 100 % de detección de ADN de N. caninum en cerebros de fetos bovinosabortados en el primer, segundo y último tercio de gestación mediante cuantificación de carga parasitaria yevaluación histopatológica de múltiples tejidos (cerebro, pulmón, corazón, hígado, riñón, diafragma, bazo,timo, glándulas adrenales y linfonódulos). Existen distintos tipos de PCR: a punto final (PCR convencional) oen tiempo real (qPCR), amplificando regiones que usan como target fracciones conservadas de genes deADN ribosómico (18S rDNA, 28S rDNA) y regiones espaciadoras (ITS1) o el gen multicopia pNc5. Dado quela autólisis fetal afecta la sensibilidad de la PCR, es preferible utilizar fragmentos cortos de ADN comotarget. La elección de una u otra PCR dependerá del equipamiento, acceso a insumos y/o experiencia dellaboratorio diagnóstico. Se debe tener en cuenta que la sensibilidad y especificidad de la PCR depende dela calidad y cantidad de ADN extraído, existiendo en el mercado una multiplicidad de kits comerciales parala extracción de ADN. Recientemente se reportó parasitemia en células mononucleares de sangre periféricaen 22 % de vacas preñadas crónicamente infectadas de rodeos de cría en el último tercio de gestaciónmediante qPCR y análisis multilocus de microsatélites. Conocer el momento en que ocurre la parasitemiapodría tener implicancias diagnósticas y terapéuticas relevantes, sin embargo, se requiere profundizar estoshallazgos. Las lesiones compatibles con N. caninum más frecuentemente halladas en tejidos de fetosabortados son: encefalitis focal no supurativa, hepatitis, miositis, necrosis focal y placentitis no supurativa.La histopatología continúa siendo una herramienta fundamental a la hora de definir si el aborto fue causadopor N. caninum, indicando un desequilibrio en la relación parásito-hospedador. El diagnósticohistopatológico puede complementarse con la Inmunohistoquímica (IHQ), sin embargo, debido a su bajasensibilidad, su aplicación en la rutina diagnóstica es limitada. Se recomienda la IFI para evaluar lapresencia de anticuerpos específicos a partir de líquido de cavidades de fetos abortados. La estructura de laplacenta del bovino impide el pasaje de inmunoglobulinas maternas, por lo que un resultado positivo indicaexposición fetal a N. caninum. No obstante, un resultado negativo no descarta la infección. Debido a que lainmunocompetencia fetal comienza a desarrollarse a partir del 4º mes de gestación si la infección por N.caninum ocurre previa a los 120 días de gestación, sería esperable no detectar anticuerpos. Además, sedebe considerar el tiempo transcurrido entre la infección y el aborto, pudiendo ser inferior al necesario parala producción de anticuerpos. Finalmente, la autólisis proporcional al tiempo transcurrido entre el aborto y laobtención de la muestra podría afectar la concentración las inmunoglobulinas fetales. Por ello, se sugiereutilizar un punto de corte bajo para la IFI, con el fin de maximizar la sensibilidad diagnóstica. También se hareportado que el uso del Immunoblot como una prueba más sensible para la serología fetal aunque suaplicación no ha sido difundida en nuestro medio. Pese a la continua generación de conocimientos mientrasno exista una vacuna disponible comercialmente, el diagnóstico continúa siendo la única herramientafundamental para el control de la neosporosis.