INVESTIGADORES
FURLAN Ricardo Luis Eugenio
congresos y reuniones científicas
Título:
DETECCIÓN DE INHIBIDORES DE TIROSINASA EN MEZCLAS COMPLEJAS NATURALES Y SEMISINTÉTICAS
Autor/es:
GARCIA, P; ZYGADLO, JA; FURLAN RLE
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Simposio; XIX Simposio Nacional de Química Orgánica; 2013
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigaciones en Química Orgánica
Resumen:
Los ensayos biológicos en formatos que facilitan la identificación y el aislamiento
de compuestos activos a partir de mezclas complejas resultan herramientas clave para la
investigación de productos naturales. Los métodos autográficos, al combinar separación
cromatográfica con determinación de actividad in situ permiten la visualización en una
placa cromatográfica del o de los constituyente/s activo/s presentes en mezclas.
La tirosinasa (EC 1.14.18.1) es una enzima bifuncional cuprífera ampliamente
distribuida en microorganismos, plantas y animales que cataliza la producción de
melanina y otros pigmentos, por oxidación de tirosina. Sus inhibidores resultan atractivos
por sus potenciales aplicaciones para la mejora del valor nutricional y la calidad de
alimentos, el control de plagas de insectos, la prevención y el tratamiento de desórdenes
de pigmentación y de otros problemas de salud relacionados con la melanina en
humanos. Los pocos agentes antimelanogénicos disponibles comercialmente, tales
como el ácido kójico y la arbutina, poseen elevada toxicidad celular y baja estabilidad
frente al oxígeno y al agua, lo que limita sus aplicaciones.1 Por esto, con el objeto de
facilitar el descubrimiento de nuevos inhibidores de tirosinasa se desarrolló un nuevo
ensayo autográfico.
Con el fin de aumentar la sensibilidad del ensayo y disminuir el límite de detección
realizando un número mínimo de experimentos, durante este desarrollo se implementó
un diseño experimental y se utilizaron técnicas de optimización logrando un límite de
detección de 15 ng para el inhibidor conocido de la enzima, ácido kójico.
Posteriormente, se comprobó la aplicabilidad del ensayo para la localización
compuestos activos en una matriz compleja, investigando la presencia de ácido kójico en
extractos vegetales crudos no inhibidores de la enzima y analizando extractos naturales
con reportada actividad inhibidora como el extracto de Glycyrrhiza glabra.2
Paralelamente, se aplicó el ensayo para el análisis del perfil de actividad de mezclas
semisintéticas generadas por bromación3 de aceites esenciales.
En todos los análisis realizados se observó que la técnica es sencilla y permite
analizar simultáneamente varias muestras en poco tiempo y con buena sensibilidad
(para inhibidores conocidos), independientemente de la complejidad de las matrices
utilizadas.
Agradecimientos: CONICET, ANPCyT y Universidad Nacional de Rosario.
Referencias:
1- Kim, Y. J.; Uyama, H. Cell. Mol. Life Sci. 2005, 62 (15), 1707-1723.
2- Simmler, C.; Pauli, G. F.; Chen, S.-N. Fitoterapia. 2013, en prensa.
3- ACS Comb. Sci. 2010, 13 (2), 200-
204.