Efecto de surfactina sobre la integridad estructural y viabilidad de esporos de Nosema ceranae.

PORRINI M; NEGRI P; AUDISIO C; SABATE, D; EGUARAS M

Buenos Aires

Congreso; 34° Congreso de Producción Animal; 2011

AAPA

Nosema ceranae ha parasitado recientemente a Apis mellifera y constituye la principal microsporidiosis en la abeja adulta, causando importantes pérdidas económicas. El único medicamento disponible (Fumagilina) actúa sobre la fase vegetativa del parásito, sin afectar los esporos de resistencia. Una cepa de Bacillus subtilis (aislada de A. mellifera) sintetiza una surfactina (lipopéptido) que ha mostrado en ensayos in vivo un efecto inhibitorio sobre esporos de N. ceranae. El objetivo fue evaluar la forma de acción de este metabolito bajo diferentes tiempos de exposición, utilizando microscopía electrónica de barrido (SEM) para detectar alteraciones en la morfología externa y tinción con las sondas fluorescentes Sitox green y DAPI (4`,6-diamidino-2-fenilindol) para cuantificar esporos sin integridad en membrana (inviables), con integridad de membrana (viables) y con su contenido extruido (vacíos). Esporos purificados se pusieron en contacto con la surfactina por 30 min., 3hs y 24hs y se acondicionaron para ambas microscopías. Para la SEM, los esporos fueron fijados en glutaraldehído, deshidratados, tratados con HMSDS y montados para fotografía. Para la microscopía de epifluorescencia, alícuotas de ~5x105 esporos fueron incubadas con las sondas y se realizaron extendidos para la cuantificación. Esporos inviables se visualizaron como óvalos verdes (filtro 470-490nm) y turquesas (filtro 395-415nm); esporos viables se visualizaron solo en color turquesa; esporos sin contenido se visualizaron solo en campo claro. Las tinciones con sondas mostraron un efecto inhibitorio a partir de las 3hs. No se registraron diferencias significativas entre tiempos de exposición. La disrupción en la integridad de la membrana esporular sería la causa de muerte del esporo, dado que no se cuantificó extrusión significativa