El coactivador RAC3 inhibe la autofagia contribuyendo al desarrollo tumoral

FERNÁNDEZ LARROSA, PEDRO NICOLÁS; ALVARADO, C.V.; RUBIO, MARÍA FERNANDA; MICENMACHER, SABRINA; RUIZ GRECCO, M.; MARTÍNEZ, NOËL G.; ZWIRNER, NORBERTO WALTER; COSTAS, MÓNICA ALEJANDRA

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

RAC3 se encuentra sobreexpresado naturalmente en diversos tumores, favoreciendo la tumorigénesis. A pesar de que RAC3 es un coactivador del factor de transcripción NF-kB y tiene actividad anti-apoptótica, no se conoce si tiene la capacidad de modular la autofagia, mecanismo que actúa como supresor del desarrollo tumoral en etapas tempranas o favoreciéndolo en etapas tardías. Nuestro objetivo fue dilucidar si RAC3 puede modular la autofagia, y estudiar el mecanismo por el cual la modula. Células HEK293 fueron transfectadas con vector vacío (VE) como control o con RAC3, RAC3 mutado en su etiqueta nuclear, o cotransfectadas IKBss (IKB super represor con capacidad de inhibir constitutivamentea NF-kB), e incUBAdas en condiciones de ayuno por 6 hs. Las células con autofagosomas fueron detectadas por MDC o con RFP-LC3, y cuantificadas en un microscopio de fluorescencia. En ayuno, las células transfectadas con RAC3 mostraron autofagia en un 10%; mientras que con VE el porcentaje de células positivas fue del 70% (p<0,01). La transfección con RAC mutado o con RAC3/IKBss se asoció con niveles de autofagia del 35-30%. Para evaluar si la acción de RAC3 requiere de la actividad de kinasas, se incUBAron las células transfectadas con RAC3 en condiciones de ayuno, en presencia o ausencia de inhibidores de kinasas. Sólo se observó una reversión en la inhibición con el tratamiento del inhibidor de p38MAPK (SB202190). Dado que en etapas tardías la autofagia es necesaria para el desarrollo del tumor, se evaluó si las condiciones de hipoxia modifican los niveles de RAC3,observándose que efectivamente esta condición conlleva a una disminución de su expresión. La sobreexpresión de RAC3 inhibe la autofagia independiente de su función nuclear, y requiere dela activación de p38MAPK. Por otra parte, el aumento de autofagia en el centro del tumor podría explicarse por la disminución de la expresión de RAC3 debido a la hipoxia.