DETERMINACIÓN DE LA ESTABILIDAD A TEMPERATURA Y pH FISOLÓGICO DE ENZIMAS FIBRINOLÍTICAS SECRETADAS POR AGARICOMICETES NATIVOS DE MISIONES

ACOSTA, GABRIELA ALEJANDRA; SVIERCZ, FRANCO AGUSTIN; MIÑO, MARÍA LAURA; BENITEZ, SILVANA FLORENCIA; FONSECA, MARÍA ISABEL; FARIÑA, JULIA INÉS; ZAPATA, PEDRO DARÍO

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Las enfermedades cardiovasculares se han convertido en una de las principales causas de muerte a nivel mundial. El mal funcionamiento del sistema plasminógeno/plasmina, encargado de disolver los coágulos de sangre, genera la acumulación de fibrina que puede llevar a trombosis, causando enfermedades cardiovasculares. Se han reportado diversos organismos capaces de producir enzimas fibrinolíticas con potencial aplicación en terapia trombolítica. Nuestro equipo de trabajo identificó 3 cepas de Agaricomicetes nativos de Misiones con capacidad de secretar enzimas fibrinolíticas, siendo el objetivo del presente trabajo determinar la estabilidad en función del tiempo, a temperatura y pH fisiológico, de las enzimas fibrinolíticas secretadas por dichas cepas.Para determinar la estabilidad enzimática en función del tiempo, a pH 7,4 y 37°C, de los sobrenadantes obtenidos del cultivo en medio líquido de {Perenniporia martius} LBM 224, {Schizophyllum commune} LBM 026 y {Schizophyllum commune} LBM 223, se activaron las cepas en medio sólido conteniendo (en g/L): extracto de malta, 12,7 y agar, 17, durante 5 días a 28°C. A partir de las placas activas se cortó un taco de 7 mm Ø cubierto de micelio joven de cada cepa y se inoculó en 20 mL de medio líquido conteniendo (en g/L): glucosa, 35; peptona de soja, 5; extracto de carne, 5; NaCl, 2; KH_2PO_4, 0,5 y MgSO_4·7H_2O, 0,5. Los cultivos se incubaron a 28°C durante 7 días para {S. commune} LBM 026 y {S. commune} LBM 223, y 14 días para {P. martius} LBM 224. El sobrenadante de cultivo se separó del micelio por centrifugación a 6.000 x g durante 10 min. Se tomaron alícuotas de 500 µL de sobrenadante a las cuales se adicionaron 500 µL de buffer Tris-HCl 50 mM pH 7,4, se incubaron a 37°C durante 5 días y se midió la actividad enzimática residual periódicamente entre las 24 y 168 h. La actividad fibrinolítica se reveló mediante el método de placas de fibrina de Astrup & Mullertz (1952).A las 24 h de incubación, la actividad fibrinolítica del sobrenadante de {P. martius} LBM 224 mostró un incremento del 13% con respecto al tiempo cero de incubación, manteniendo el 50% de actividad a las 48 h, y el 16% a las 120 h. Para sobrenadantes de {S. commune} LBM 026 y {S. commune} LBM 223 se observó una estabilidad de la actividad fibrinolítica del 70% a las 24 h, manteniendo el 50% de dicha actividad hasta las 120 h para {S. commune} LBM 223 y hasta las 72 h para {S. commune} LBM 026. A las 168 h de incubación, los sobrenadantes de {S. commune} LBM 223 y LBM 026 presentaron una actividad del 27 y 16%, respectivamente, mientras que {P. martius} LBM 224 no presentó actividad. Por lo que se concluye que la cepa con mayor estabilidad de la actividad fibrinolítica fue {S. commune} LBM 223, motivo por el cual ha sido seleccionada para continuar estudiando su potencial como productora de enzimas fibrinolíticas.