LA INFECCIÓN POR Brucella abortus ALTERA LA DIFERENCIACIÓN DE ADIPOCITOS Y OSTEOBLASTOS

FREIBERGER, ROSA NICOLE; DELPINO, MARÍA VICTORIA

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Jornada; XXIII JORNADAS ANUALES DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BIOLOGÍA ?Evolución, desarrollo y cambio tecnológico: impacto sobre el crecimiento de los individuos y la sociedad?; 2021

Sociedad Argentina de Biología

La brucelosis osteoarticular es la localización más común de la forma activa de la enfermedad en el hombre. Las células mesenquimales (MSC) de médula ósea pueden diferenciarse a células del linaje adipogénico u osteogénico, en un proceso recíprocamente regulado, que puede ser alterado en condiciones patológicas. El objetivo del presente trabajo fue determinar si la infección por B. abortus es capaz de modular la diferenciación a adipocitos y osteoblastos (células implicadas en la deposición de matriz ósea) a partir de sus precursores.Para ello, estudiamos si los sobrenadantes de cultivo de adipocitos diferenciados infectados por B.abortus eran capaces de modular la diferenciación a osteoblastos y viceversa. Se utilizaron las líneas celulares murinas de preadipocitos (3T3-L1) y preosteoblastos (MC3T3-E1) que se diferenciaron a células maduras siguiendo los protocolos provistos por ATCC. Las células diferenciadas fueron infectadas con B. abortus a una multiplicidad de infección (MOI) 100, como control se utilizaron células diferenciadas sin infectar. Los sobrenadantes de cultivo se cosecharon a las 24 horas. Nuestros resultados indicaron que los sobrenadantes de los adipocitos infectados por B. abortus inhiben la diferenciación de los osteoblastos. Esto fue evidenciado por la disminución de los principales factores de transcripción involucrados en la osteoblastogénesis, Runx2 y osterix, determinada por RT-qPCR y por la reducción de la actividad de la fosfatasa alcalina que es la enzima esencial para la mineralización. Esta última fue determinada utilizando el sustrato BCIP (5-bromo-4-cloro-3indolil fosfato)/NBT (azul de nitro-tetrazolio) por microscopía. Mediante la técnica de ELISA demostramos que los sobrenadantes de los adipocitos infectados por B. abortus fueron capaces de inducir el aumento en la secreción de IL-6, un regulador negativo de la mineralización, y de RANKL, citoquina implicada en la diferenciación de osteoclastos (células que participan en la resorción ósea). En contraste, los sobrenadantes de cultivo de osteoblastos diferenciados infectados por B. abortus fueron capaces de estimular la diferenciación de adipocitos a partir de sus precursores. Esto fue evidenciado por el aumento del número de células diferenciadas determinada por microscopía mediante la tinción de gotas lipídicas con Oil Red O y BodiPy 493/503.Para evaluar si B. abortus puede modular la diferenciación a osteoblastos y adipocitos a partir de MSC, utilizamos células generadas a partir de la reprogramación de fibroblastos provenientes de biopsias de piel de pacientes sanos. La infección por B. abortus de MSC infectadas a MOI 100 y 1000 indujo un aumento de la acumulación de lípidos en los adipocitos infectados respecto de los controles sin infectar. En conjunto nuestros resultados indican que B. abortus puede contribuir al daño osteoarticular observado durante la infección, a través de la acumulación de lípidos en los adipocitos e inhibición la diferenciación de los osteoblastos.