La familia de la proteína quinasa D regula el proceso de capacitación

MARTINEZ-LEON E; OSYCKA-SALUT C; MARIN BRIGGILER, CI; JABLOÑSKI M; BUFFONE MG; REY O

Jornada; XXIV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología (SAB); 2022

Sociedad Argentina de Biología

DR1.2LA FAMILIA DE LA PROTEÍNA QUINASA D REGULA EL PROCESO DE CAPACITACIÓNMartínez-León E1, Osycka-Salut C2, Marin-Briggiler Cl3, Jabloñski M3, Buffone MG3, Rey O1.1. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, Instituto de Inmunología, Genética yMetabolismo, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Hospital de Clínicas "José de San Martín,"Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.2. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (IIBIO-UNSAM-CONICET), Buenos Aires, Argentina3. Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME-CONICET), Buenos Aires, Argentina.La familia de la proteína quinasa D (PKDs), consta de tres serina/treonina quinasas denominadas PKD1, PKD2 y PKD3. Estas isoenzimas están implicadas en la regulación de una notable variedad de procesos biológicos fundamentales, incluyendo la transducción de señales, remodelado del citoesqueleto, estrés oxidativo, entre otros. Los espermatozoides son células especializadas transcripcionalmente inactivas dependientes de modificaciones postraduccionales, como la fosforilación de proteínas, para llevar a cabo sus funciones. Dichas modificaciones ocurren durante el proceso denominado capacitación espermática. La presencia y función de la PKDs en el gameto masculino, no ha sido descripta en ninguna especie. Nuestro objetivo fue caracterizar la presencia y la(s) función(es) de PKDs en este modelo celular. Mediante inmunofluorescencia indirecta (IIF) y western blot (WB), se observó que PKD1/2 se encuentra presente y de manera activa (p-PKD) en espermatozoides de bovino, equino, ratón y humanos incubados en condiciones no capacitantes (MNC) y capacitantes (MC). Si bien la localización de PKD es muy similar en las células de todas las especies en estudio, de manera homogénea en cabeza y flagelo, el patrón de distribución de p-PKD varía entre estas. En cuanto a PKD3, se observó que está presente y se localiza principalmente en la pieza media del flagelo, observándose una llamativa concentración de la proteína en la pieza conectora. Respecto a la posible función biológica, se determinó si PKD estaría relacionada con la regulación del proceso de capacitación espermática en ratón. Al incubar espermatozoides en MC con inhibidores específicos de PKD (Kb 142-70 [5 uM] y CRT 0066101 [2,5 uM]), mediante WB se observó un aumento en la fosforilación de residuos de tirosina y proteínas sustratos de PKA respecto al control (MC). Además, en estas mismas condiciones se observó un aumento significativo del porcentaje de espermatozoides móviles (p