TcBDF1, una proteína glicosomal con bromodominio

RITAGLIATI C; VILLANOVA G.V.; ALONSO V.; CRIBB P; SERRA E.C.

Asconchinga, Cordoba

Congreso; XXIV Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

Sociedad Argentina de Protozoologia

El bromodominio, es un dominio proteico de unión a lisina acetilada y presenta un módulo evolutivamente conservado presente casi exclusivamente en proteínas de localización nuclear. La mayor parte de los eventos regulados por acetilación estudiados hasta el momento, se relacionan con los niveles de acetilación de las histonas. Sin embargo, en los últimos años, estudios de proteómica detectaron un gran número de proteínas acetiladas distribuidas en los distintos compartimientos celulares e involucradas en una variedad de procesos: transcripción, traducción, progresión del ciclo celular, respuesta al estrés, apoptosis y distintas vías metabólicas. Sorprendentemente, estudios tanto en bacterias como en humanos han reportado que el 90% de las enzimas metabólicas están acetiladas y que cambios en la disponibilidad de nutrientes altera el perfil de acetilación y la actividad de estas enzimas. Más aun, los efectos de la acetilación parecen coordinar simultáneamente varias vías. TcBDF1 es una proteína de Trypanosoma cruzi que presenta un bromodominio entre los aminoácidos 30 y 115. Su porción C-terminal puede dividirse en una región rica en glutaminas y otra rica en aminoácidos ácidos. Este tipo de secuencias de baja complejidad suelen ser encontradas en zonas poco estructuradas de interacción con otras proteínas. Utilizando anticuerpos purificados obtenidos contra TcBDF1 recombinante, se verificó la expresión de la proteína en todos los estadios de vida de T. cruzi, mediante ensayos de Westen Blot (WB) e inmunofluorescencia (IF). Ambos ensayos muestran que TcBDF1 se localiza fuera del núcleo. Además, en el ensayo de IF se utilizaron marcadores de diferentes compartimentos celulares como controles: anti-GADH (citosol), anti-hexoquinasa (glicosoma), y mitotracker (mitocondria). El patrón de fluorescencia punteado obtenido para BDF1 es indistinguible del de la enzima hexoquinasa. La localización subcelular, fue verificada mediante WB sobre extractos de parásitos permeabilizados selectivamente con digitonina, observándose un patrón característico de proteínas glicosomales. Para corroborar estos resultados se realizó un enriquecimiento glicosomal mediante centrifugación diferencial, obteniéndose nuevamente, la señal correspondiente a TcBDF1 en la fracción glicosomal. Este trabajo constituye la primera identificación de un bromodominio de localización glicosomal en Trypanosoma cruzi y sugiere la existencia de mecanismos de acetilación relacionados con la actividad glicolítica en este parásito.