Terapia Fotodinámica a partir de ALA combinada con irradiación infrarroja, como alternativa para el tratamiento de infecciones bacterianas

TOMÁS, SEBASTIÁN; CALVO, GUSTAVO; CÉSPEDES, MARIELA; SÁENZ, DANIEL; DI VENOSA, GABRIELA; CASAS, ADRIANA; MAMONE, LEANDRO

Congreso; VI Reunion del grupo argentino de fotobiologia (GRAFOB); 2022

RESUMEN: LaTerapia Fotodinámica Antimicrobiana (TFDA) combina un compuesto fotosensibilizante(FS) con luz visible dando lugar a especies reactivas que provocan lainactivación de microorganismos[1]. Por otra parte, la TerapiaFototérmica (TFT) emplea luz del espectro infrarrojo cercano, para liberarenergía en forma de calor, mediante la excitación de moléculas de agua ocromóforos internos[2]. El ácido5-aminolevulínico (ALA) es un precursor de la síntesis endógena de porfirinas, fotosensiblizantestanto en células eucariotas como en bacterias. El objetivo deeste trabajo fue evaluar la producción de porfirinas, luego de topicar ALA, enun modelo in vivo de infección subcutáneade Staphylococcus aureus en ratones yregistrar el efecto de la TFDA sobre la evolución de dichas infecciones. Además,se empleó la TFT esperando incrementar la síntesis de porfirinas a partir deALA.Se infectaronratones BALB/c y CF-1, inoculando intradérmicamente una suspensión de S. aureus RN6390. Luego de 48 h, se topicóuna solución de ALA 20 mg/ml, sobre la piel en la zona de la infección y se evaluóla fluorescencia emitida bajo lámpara de 365 nm y diferentes filtros ópticos. La TFDA se efectuóempleando lámparas halógenas (500 W, GE, 58 J/cm2). Se determinó la progresiónde las infecciones durante 48 h luego de la TFDA, midiendo el área deinfección.Para la TFT se empleóun láser de 980 nm en condiciones que no elevaron la temperatura de la piel porsobre los 37 ⁰C (3 dosis de 10 seg a 8 W). Se determinó el tipo de porfirinasproducidas a partir de ALA con o sin exposición a TFT mediante espectroscopíade fluorescencia a partir de homogenatos de piel y se observó localización de porfirinaspor microscopía de fluorescencia en cortes frescos de piel.La síntesis máximade porfirinas en las pieles topicadas con ALA, se observó a las 4 h. Luego deextracción química, se encontraron niveles más altos de porfirinas en laspieles infectadas que en las no infectadas. Sin embargo, la fluorescenciadirecta bajo luz de 365 nm fue indetectable sobre las infecciones, pero fueposible observarla desde la cara interna de la piel (luego de sacrificar losratones). A pesar de ello, las imágenes de microscopía de fluorescencia mostraronporfirinas en la zona superficial de las pieles infectadas (epidermis). Porotra parte, resultados preliminares de microscopía de fluorescencia sugierenque la TFT aumentó la síntesis de porfirinas en las pieles infectadas. Losperfiles fluorométricos indicaron que la principal porfirina sintetizada fueProtoporfirina IX.Se observóademás, una tendencia a la reducción del área de las infecciones luego de laTFDA con ALA respecto a los controles sin tratar. Estos resultadossugieren que el ALA-TFDA sería un tratamiento promisorio de infeccionessuperficiales en combinación con la TFT y particularmente, el ALA es unamolécula que podría ser empleada en la detección y seguimiento de infecciones.