Modelo de infección bacteriana in vivo tratado con Terapia Fotodinámica a partir de ALA, combinada con irradiación infrarroja.

TOMÁS, SEBASTIÁN; CALVO, GUSTAVO; CÉSPEDES, MARIELA; SÁENZ, DANIEL; DI VENOSA, GABRIELA; CASAS, ADRIANA; MAMONE, LEANDRO

Congreso; 18º Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas José de San Martín.; 2022

La Terapia Fotodinámica Antimicrobiana (TFDA) es un tratamiento queemplea un compuesto fotosensibilizante (FS), el cual, luego de absorber luzvisible en presencia de oxigeno molecular, genera especies reactivas deloxigeno, que provocan el daño y la inactivación de los microorganismos aeliminar. Al no poseer blancos bioquímicos específicos, la TFDA posee laventaja de ser efectiva frente a cepas resistentes a antibióticos, lo cual la convierteen una alternativa promisoria en el tratamiento de especies bacterianasmultiresistentes. Por otra parte, la Terapia Fototérmica (TFT) emplea luz delespectro infrarrojo cercano, para liberar energía en forma de calor, mediantela excitación de moléculas de agua o cromóforos internos. El ácido5-aminolevulínico (ALA) es un precursor de la síntesis endógena de porfirinas, algunasde las cuales pueden actuar como FSs tanto en células eucariotas como enbacterias.  El objetivo de este trabajo fue evaluar la producción de porfirinas,luego de topicar con ALA, en un modelo invivo de infección subcutánea deStaphylococcus aureus en ratones, y a su vez, evaluar el efecto de la TFDAsobre la progresión de las infecciones. Además, se empleó la TFT para incrementarla síntesis de porfirinas a partir de ALA. Los ratones fueron infectados, inoculando intradérmicamente unasuspensión de S. aureus RN6390. Luegode 48 h, se topicó una solución de ALA 20 mg/ml, sobre la piel en la zona de lainfección y se evaluó la fluorescencia emitida por las porfirinas sintetizadas,empleando diferentes filtros ópticos. La TFDA se realizo empleando un arreglo de  lámparas halógenas y un dispositivo laser conemisión a 635 nm, como fuentes de luz alternativas. Se determinó el efecto dela TFDA, midiendo el área de la infección durante los siete días posteriores altratamiento.La TFT se llevo a cabo mediante un dispositivo láser con emisión enel infrarrojo cercano (980 nm), empleando dosis de radiación que no elevaron latemperatura de la piel por sobre los 37 ⁰C. El tipo de porfirinas producidas a partir de ALA con o sinexposición a TFT, se determinó mediante espectroscopía de fluorescencia apartir de homogenatos de piel, y se observó, además, la localización de las porfirinaspor microscopía de fluorescencia en cortes frescos de piel. La síntesis máxima de porfirinas en las pieles topicadas con ALA, seobservó a las 4 h. Se encontraron niveles más altos de porfirinas en las pielesinfectadas que en las no infectadas. Si bien, la fluorescencia de lasporfirinas fue indetectable sobre la superficie de la piel infectada, fueposible registrarla midiendo desde la cara interna de la piel (luego desacrificar los ratones). A pesar de ello, las imágenes de microscopía defluorescencia mostraron porfirinas en la zona superficial de las pielesinfectadas (epidermis). Por otra parte, resultados de microscopía defluorescencia sugieren que la TFT aumentó la síntesis de porfirinas en laspieles infectadas. Los perfiles fluorométricos indicaron que la principalporfirina sintetizada fue Protoporfirina IX.Se observó además, la reducción del área de las infecciones luego dela TFDA con ALA respecto a los controles sin tratar. El dispositivo laser de635 nm, resulto más eficiente que las lámparas halógenas, como fuente de luz aemplear en la TFDA al tratar este tipo de infecciones.Estos resultados sugieren que la TFDA empleando ALA como precursorde porfirinas FSs, es una opción promisoria para tratar infeccionessuperficiales. En particular, el ALA es una molécula que podría ser empleada enla detección y tratamiento de infecciones, y la TFT potenciaría estos efectos.