Efecto antitumoral sinérgico de inhibidores de esfingosina quinasa en combinación con 2´-nitroflavona en células tumorales mamarias

JUAN MANUEL ANSELMI RELATS; LEONOR P. ROGUIN; MARIEL MARDER; JULIETA MARINO; VIVIANA C. BLANK

Buenos Aires

Jornada; XXXV Jornadas Multidisciplinarias de Oncología; 2022

Instituto de Oncología Angel H. Roffo

Efecto antitumoral sinérgico de inhibidores de esfingosina quinasa en combinación con 2´-nitroflavona en células tumorales mamariasJuan Manuel Anselmi Relats, Leonor Roguin, Mariel Marder, Julieta Marino, Viviana BlankInstituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBA-CONICET), Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos AiresIntroducciónPreviamente demostramos que el flavonoide sintético 2’nitroflavona (2NF) ejerce una acción antitumoral in vitro e in vivo en un modelo murino de cáncer de mama. Asimismo, existen evidencias de que ciertos flavonoides aumentan los niveles de ceramidas proapoptóticas y que la enzima esfingosina quinasa-1 (SPHK1), que intervine en el catabolismo de ceramidas, ejerce un papel crucial en la resistencia al tratamiento del cáncer de mama. La activación de esta enzima requiere de la fosforilación en el aminoácido Ser 225 y su translocación a la membrana plasmática para estar en contacto con los esfingolípidos.ObjetivoEl objetivo de nuestro trabajo fue estudiar la acción combinada de 2NF con inhibidores de SPHK1 sobre el crecimiento de células tumorales mamarias humanas y murinas.Materiales y métodosSe emplearon las líneas de células tumorales mamarias humanas MDA-MB-453 y murinas LM3 y las no tumorales NMuMG. Los inhibidores de SPHK1 estudiados fueron el safingol y el SKI II. El flavonoide 2NF fue obtenido por síntesis química. Los niveles de la enzima SPHK1, de su forma fosforilada P-SPHK1 y de la proteína Bax se analizaron por ensayos de Western Blot. Para evaluar la acción antiproliferativa de los compuestos solos o combinados se empleó el método de la hexosaminidasa. A partir de las curvas concentración-respuesta obtenidas para las distintas combinaciones, se investigó si el efecto era sinérgico, aditivo o antagónico. Para ello, se obtuvieron los valores de coeficiente de interacción (CI) utilizando el programa Compusyn. Las características morfológicas de las células luego del tratamiento con 2NF y safingol se observaron por microscopía de fluorescencia utilizando la tinción con naranja de acridina y bromuro de etidio. La posible interacción entre la 2NF y la SPHK1 (PDB: 3VZB 2,00 Å) se estudió con el servidor web SwissDock.ResultadosDemostramos que los niveles de SPHK1 están aumentados en las líneas de células tumorales (1,8±0,4 veces, MDA-MB-453; 3,0±0,5 veces, LM3) con respecto a las no tumorales NMuMG (p