Construcción de una biblioteca de alcaloides por UHPLC-DAD-MS/MS para el screening de extractos de especies argentinas de la familia Amaryllidaceae

JAVIER E. ORTIZ; JAUME BASTIDA; GABRIELA E. FERESIN

San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2022

SOCIEDAD ARGENTINA DE ESPECTROMETRIA DE MASA

Las especies de la familia Amaryllidaceae, producen una serie de alcaloides particulares que soncasi exclusivos de la subfamilia Amaryllidoideae (800 especies y 59 géneros) y que poseen unamplio rango de actividades biológicas (anticolinesterasa, antiparasitario, citotóxico, etc). Se haninformado 636 alcaloides aislados e identificados en la subfamilia Amaryllidoideae1. La utilizaciónde bibliotecas espectrales en técnicas hifenadas como GC-EI-MS han probado ser una herramientaeficaz para la caracterización química de extractos vegetales enriquecidos en alcaloides deespecies de Amaryllidaceae1. El presente trabajo describe la creación de una biblioteca por UHPLCDAD-ESI-MS/MS construida con los espectros de masa de 40 alcaloides de las Amaryllidaceae. Setrabajó con un equipo Waters Aqcuity UPLC H-class acoplado a un espectrómetro de masa conelectrospray Xevo TQ-S micro QQQ. Se utilizaron 2 columnas: Acquity UPLC BEH C18, 130Å, 1.7µm, 2.1 mm x 100 mm y Phenomenex LC Luna C18, 100 Å, 3 µm, 4.6mm x 150mm. La fase móvilutilizada fue isocrática, componiéndose de Agua:ACN-50:50 (ambos al 0.1% en Ácido fórmico y0.05% Acetato de Amonio) en una corrida cromatográfica de 45min de duración. Se utilizó atropinay cafeína como patrones internos para establecer el índice de retención. Se registraron en la basede datos los espectros de masa de 40 alcaloides a una concentración de 1 ppm obtenidos en modoESI+ y ESI- tanto a partir de su ruptura en la fuente como en la celda de colisión con Ar (CID -MS/MS) y, en ambos casos, se utilizaron 3 valores de energía de las variables: Energía de Cono,energía de capilar y energía de colisión. El software para el análisis de los datos (generación de lasbibliotecas, procesamiento de cromatogramas y espectros) fue Chromalynx®. Luego de construidala biblioteca se analizaron los extractos enriquecidos en alcaloides de 6 especies de Amaryllidaceaepreviamente caracterizadas a través de GC-EI-MS (con biblioteca de aprox 300 alcaloides deAmaryllidaceae). El comportamiento cromatográfico de los alcaloides en términos de tiempo deretención queda corregido correctamente por el uso de los patrones internos utilizados,consolidándose como una variable más para caracterizar extractos. Los patrones de fragmentaciónobtenidos en la fuente se diferencian notablemente de los obtenidos en la CID. Esta última generamás fragmentos a partir de los iones moleculares y muestra iones característicos que también seobservan comparando con los patrones de GC-EI-MS. Se identificaron alcaloides en todas lasespecies analizadas a través de la biblioteca construida y el grado de coincidencia entre losespectros analizados varió entre 700 a 900 (en una escala de 1-1000). 3 de las especies analizadasmostraron compuestos que no pudieron ser identificados por la biblioteca y que representanpotenciales compuestos novedosos.La utilización de bibliotecas en el análisis por UHPLC-MS/MS representa una poderosa herramientaen la búsqueda y aislamiento de nuevos alcaloides bioactivos.