Estudio in vitro e in vivo de la expresión de las proteínas inducibles por frío, CIRP y RBM3, en la retina expuesta a hipotermia

REY FUNES, M., LARRAYOZ, I., CONTARTESE, D., ROLÓN, F., SAROTTO, A., DORFMAN, V.B., MARTÍNEZ, A., LOIDL, C.F.

Congreso; LX Reunión Científica Anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

La hipotermia es una terapia eficaz para prevenir o evitar el daño enel SNC. En general, ante la exposición al frío se reduce la expresiónproteica, pero existen 2 proteínas cuya expresión aumenta, CIRP(Cold-inducible RNA binding protein) y RBM3 (RNA binding motifprotein 3). Éstas se unen al ARNm estabilizándolo, lo cual impediría latraducción de proteínas de acción neurotóxica. El objetivo de estetrabajo ha sido establecer su comportamiento tanto in vitro como invivo por primera vez en la retina. Líneas de células de la retina R28(retina neural de rata) y mRPE (epitelio pigmentario de la retina demono) se expusieron a diferentes temperaturas y tiempos, para medirla expresión de RBM3 y CIRP mediante PCR cuantitativa en tiemporeal (QRT-PCR) y Western Blot. Además, para el estudio in vivo seutilizaron ratas albinas Sprague-Dawley expuestas a un ambiente fríoa 7-8°C, durante 15 min en ratas neonatas y durante 3 hs en ratasadultas (40 días PN). Las retinas fueron procesadas para el análisismolecular (QRT-PCR y Western Blot) o fijadas en paraformaldehído al4% para análisis morfológico por inmunofluorescencia multiple (IFM)con anticuerpos contra CIRP, RBM3 y marcadores específicos de losdiferentes tipos celulares de la retina. Las colocalizaciones seobservaron con miscroscopía confocal. En ambas líneas celulares,aumentó significativamente la expresión de RBM3 y CIRP después dela exposición a un ambiente frío, siendo su pico a las 6 horas a 32 °C.En el estudio in vivo, las retinas de neonatos y adultos expuestos ahipotermia presentaron inmunorreactividad significativa para ambasproteínas con diferentes patrones de localización. Las IMF permitieronevidenciar la expresión tanto en neuronas como en glía de Müller yepitelio pigmentario así como establecer la colocalización de CIRP yRBM3. En condiciones de hipotermia, estas proteínas podrían ser lasresponsables de los efectos beneficiosos del frío a través de su uniónespecífica al ARNm.