PRODUCCIÓN DE RBD DE SARS-CoV-2 COMO INMUNÓGENO EN LLAMAS (Lama glama)

STAGNETTO, AGUSTÍN; TOMAS-GRAU, RODRIGO HERNÁN; PLOPER, DIEGO; ÁVILA, CÉSAR LUÍS; SOLIZ SANTANDER, SILVANA ESTEFANÍA; ARGAÑARAZ, MARTÍN; ZAMPINI, RENATO; MALDONADO GALDEANO, CAROLINA; CAZORLA, SILVIA; PERDIGÓN, GABRIELA; APICHELA, SILVANA; CHEHÍN, ROSANA; VERA PINGITORE, ESTEBAN

San Miguel de Tucumán

Jornada; IV Jornadas de la Academia de Ciencias de la Salud de Tucumán; 2022

Academia de Ciencias de la Salud de Tucumán

El dominio de unión a receptor (receptor binding domain, RBD) de la proteína Spike del SARS-CoV-2, en su interacción con el receptor ACE2 permite el ingreso del virus a la célula huésped. Se comprobó que existe una correlación positiva entre el título de inmunoglobulinas G (IgG) anti-RBD y de anticuerpos (Ac) neutralizantes contra el virus. En este contexto, inmunoterapias pasivas como el plasma convaleciente y el suero equino hiperinmune ganaron relevancia como terapias frente a COVID-19. Otra alternativa prometedora de este tipo es la producción de Ac policlonales generados a partir de llamas (Lama glama). Dentro de las inmunoglobulinas producidas por camélidos, existe una subclase particular: las IgG de cadena pesada (IgG2 e IgG3), las cuales son precursores de los fragmentos de Ac de dominio único (VHH). Estos últimos presentan características distintivas respecto de los Ac convencionales que los convierten en potenciales herramientas terapéuticas y diagnósticas. Por ello, nos propusimos obtener RBD recombinante como inmunógeno para generar Ac anti-RBD en llamas. Para logralo, se expresó heterólogamente RBD de SARS-CoV-2 en la línea celular HEK 293T, empleando un sistema lentiviral con la secuencia codificante del RBD. Luego de su expresión y secreción, el RBD recombinante fue purificado a partir del sobrenadante de cultivo mediante cromatografía líquida empelando una columna de afinidad (HisTrap HP). Posteriormente, se diseñó y se evaluó un esquema de inmunización en un ejemplar de llama macho, el cual fue inoculado con una dosis inicial de RBD (200 µg), seguido de refuerzos periódicos (150 µg; 9, 19 y 41 días post-inmunización inicial). Se realizaron sangrías exploratorias a fin de evaluar los títulos de Ac alcanzados, y sangrías de mayor volumen (700 mL) para la obtención de plasma rico en Ac anti-RBD. Asimismo, se destaca que la cuantificación de las inmunoglobulinas generadas se realizó por medio de un test de ELISA “in house”, para lo que se utilizó el dominio RBD purificado como elemento de captura inmovilizado en la microplaca de poliestireno. La determinación de anticuerpos en el suero de llama reveló un esquema de inmunización exitoso, lográndose un título máximo de 168.000 a los 28 dpi. Estos resultados confirman que el RBD recombinante obtenido en nuestro laboratorio fue un inmunógeno eficaz, permitiendo alcanzar títulos elevados de Ac. De esta manera se sentaron las bases para la producción y purificación de Ac policlonales anti-RBD del SARS-CoV-2.