El Compuesto A (CpdA) disminuye la muerte y mejora la funcionalidad de islotes pancreáticos murinos y humanos en un microambiente inflamatorio

ANDREONE, L; ORELLANO, MS; SETULA, C; PERONE, MJ

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Diabetes; 2022

Introducción: El proceso autoinmune durante la diabetes tipo 1 (DM1) contribuye a la insulitis; en este contexto, el estrés de las células-β y su posterior deficiencia en la secreción de insulina preceden a los signos clínicos de la enfermedad. El microambiente inflamatorio del islote contribuye a la activación del estrés oxidativo y de retículo endoplásmico (RE) resultando en la disfunción y muerte de las células-β. Hemos reportado que la pequeña molécula CpdA regula células clave en la respuesta inmune e inflamatoria, los linfocitos T y las células dendríticas. También, observamos que el CpdA disminuye el estrés oxidativo y de RE inducido por citoquinas pro-inflamatorias en células-β y que la administración in vivo del CpdA disminuye la insulitis y retarda la aparición de hiperglucemia en un modelo murino de diabetes autoinmune. El desarrollo de nuevos agentes con acción anti-inflamatoria e inmunomoduladora y potencial protector dirigido a la señalización disfuncional de las células-β posee interés clínico en la diabetes.Objetivos: Explorar el efecto del CpdA sobre la muerte celular y secreción de insulina ante la injuria de citoquinas pro-inflamatorias (IL-1+IFN-+TNF; CYT) en islotes pancreáticos murinos y humanos.Materiales y Métodos: Como modelo experimental utilizamos islotes pancreáticos aislados de ratones C57BL/6J y de donantes cadavéricos mediante digestión enzimática y centrifugación en gradiente de densidad seguida de selección manual. Para estandarizar, aquellos islotes con un diámetro de 100-125 μm (ratón) ó 150-200 μm (humano) se consideraron como un equivalente de islotes (IEQ). Fórmula química del CpdA: cloruro de 2-(4-acetoxifenil)-2-cloro-N-metil-etilamonio. Se utilizó RT-qPCR (Sybr Green/Rox) para el análisis de la expresión de ARNm; se analizó muerte celular mediante tinción con Hoechst y yoduro de propidio. El índice GSIS (glucose-stimulated insulin secretion) se expresó como la relación entre la insulina secretada durante una hora por estímulo con glucosa 2 y 20mM. La insulina se cuantifico por ELISA.Resultados: El tratamiento con CpdA (10μM) redujo el porcentaje de muerte celular (12,5 ± 4,8 % vs. 30,3 ± 6,9 %, p