Eliminación de L-canavanina durante el ensilado de Vicia villosa. ¿Se podría evitar la toxicidad producida en pastoreo?

JUAN POO; EMILIANO SOSA; GERMÁN JOSÉ CANTÓN; FACUNDO URTIZBIRIA; MIGUEL BUFFARINI; CASTELLI V; LÓPEZ S

Congreso; 45° Congreso Argentino de Producción Animal; 2022

IntroducciónLa Vicia spp. es una leguminosa anual que se utiliza con fines agronómicos como "puente verde" para la fijación de nitrógeno y evitar la erosión del suelo, entre otros aspectos.También suele utilizarse para pastoreo en bovinos durante elinvierno. Sin embargo, el consumo de Vicia villosa por bovinospuede provocar un cuadro tóxico, principalmente cuando laplanta se encuentra en estado de floración o fructificación. Sibien no está completamente dilucidado cual es el principiotóxico, se cree que la L-canavanina, aminoácido no proteicopodría estar involucrada. El objetivo de este trabajo esdeterminar si la concentración de L-canavanina disminuye enel ensilado de V. villosa para brindar una alternativa alpastoreo realizando reservas forrajeras.Materiales y Métodos El Servicio de Diagnóstico Veterinario Especializado del una de las muestras y cantidades variables de testigo (0,5-4ug). La placa fue desarrollada bajo condiciones controladasde temperatura (24 ºC) y humedad (33%). Se utilizó comofase móvil butanaol:agua:acido acético (2:1:1). La placa fuerevelada con ninhidrina (0,3%) y calor y se observó bajo luzvisible y UV 365. Posteriormente la placa fue analizadadensitometricamente a 500 nm. Se integraron las áreas bajola curva para realizar la curva de calibración con testigo de Lcanavaninay cuantificar su presencia en cada una de lasmuestras. Además, se realizó espectro de absorbancia de labanda de la L-canavanina posterior a la derivatizaciónResultados y DiscusiónAl analizar la placa de TLC luego del revelado conninhidrina, se observó una banda naranja-marrón a unRf=0,29 para L-canavanina testigo, y una banda coincidenteen color y Rf en las muestras obtenidas de semillas INTA Balcarce realizó una visita en diciembre de 2020 a unestablecimiento ganadero ubicado en el departamento deChapaleufú, provincia de La Pampa en donde se reportaroncasos de intoxicación por consumo de V. villosa. Se tomaronmuestras de partes aéreas en estado de floración de V.villosa de diferentes potreros (potrero problema y control).Las muestras se mantuvieron a 4ºC hasta su posteriorprocesamiento. Para el ensilado, se cortaron las plantas a untamaño máximo de 5 cm y se incorporaron a microsilos dePVC, con un peso medio de 5 kg, se compactaron paragenerar un estado de anaerobiosis y se agregaron 5 mg deinoculante (Silobac 5®, CHR HANSEN) para generar un medioácido. Luego de 2 años, se abrieron los microsilos para suanálisis. Para el henificado, se dejaron secar las muestras atemperatura ambiente durante dos días. Se conservaron enun lugar seco a temperatura ambiente hasta su análisis. Paraambos potreros se utilizaron las partes aéreas y las semillaspara su análisis individual.La detección y cuantificación de L-canavanina se realizópor cromatografía en capa delgada en un equipoautomatizado (CAMAG). Como control se usó una solución henificada de V. villosa extraídas con HCl 0,1 N. La presenciade L-canavanina en semillas concuerda con lo reportado enla bibliografía (Rosental, 1990). Cuando se analizaron lasmuestras totales (partes aéreas+semillas) del henificado deambos potreros, no se detectó L-canavanina bajo lascondiciones descriptas. Esto podría deberse a un efecto dedilución en el total de la muestra. La cuantificación de Lcanavaninaensemillasdemuestrashenificadasfuede1,55y2,3% P/P en muestras problema y controlrespectivamente. Por otro lado, no se detectó L-canavaninaen las semillas ni en la muestra total (partes aereas+semillas)de V. villosa ensilada de los potreros problema y control. Sinembargo, se observa la aparición de otras bandas máspolares, que podría estar evidenciando una degradación omodificación de L-canavanina o correspondiente acompuestos que no pudieron ser caracterizados aun y seencuentran en estudio.ConclusionesLa eliminación de la L-canavanina en la V. villosa ensiladapodría indicar una buena alternativa para la utilización deeste forraje, ante la sospecha de una potencial intoxicación. de 1mg/ml de L-canavanina (Sigma-Aldrich®). A partir de 2 gde cada una de las muestras vegetales, se realizaronextracciones sucesivas. Primero se agregaron 50 ml de unamezcla etanol:agua (80:20), se sonicó por 15min y se filtró. Alos restos vegetales se le agregaron posteriormente 50 ml deHCL 0,1N siguiendo el mismo procedimiento descrito. Esteúltimo paso se repitió una segunda vez. Se utilizaron placasde Silica Gel 60 F254 (Merck) y se sembraron 5 l de cada No obstante, hay que seguir profundizando en el análisis delos compuestos encontrados y su toxicidad.Este es el primer reporte donde se utiliza esta técnicapara la detección de L-canavanina.BibliografíaRosental L (1990) Plant Physiol. (1990) 94, 1-3.