INVESTIGADORES
CAMPERO Lucia Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación de protozoos de importancia sanitaria en mamíferos exóticos invasores de Argentina.
Autor/es:
RUNCO, M.; GOS, M.L. ; GUICHÓN, M.L.; VENTURINI, M.C.; CAMPERO, L.M.
Lugar:
Rosario- Modalidad Virtual
Reunión:
Congreso; XXI Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas. Virtual, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario; 2021
Resumen:
Debido a actividades de origen antrópico en Argentina existen poblaciones establecidas deespecies silvestres que se encuentran fuera de su rango de distribución natural, denominadasexóticas, y consideradas invasoras por los importantes daños ambientales, sanitarios yeconómicos que producen. Entre los mamíferos invasores presentes en nuestro país y que sonestudiados en este trabajo, se encuentran el visón americano (Neovison vison), el jabalíeuropeo (Sus scrofa), el ciervo colorado (Cervus elaphus), la ardilla de vientre rojo(Callosciurus erythraeus), la rata negra (Rattus rattus), y la rata noruega (Rattus norvegicus).Todos ellos conviven con animales silvestres autóctonos donde comparten el mismo ambientey también con animales de producción y de compañía ya que cohabitan en las cercanías deestablecimientos ganaderos y zonas residenciales, respectivamente. A su vez puedeninteractuar con las personas mediante encuentros azarosos o actividades que impliquen sumanipulación/consumo, como ocurre con la caza de especies cinegéticas. La presencia deparásitos protozoarios como Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Sarcocystis spp. yCryptosporidium spp. en las especies silvestres exóticas representa un riesgo para la saludpública y animal ya que estos mamíferos podrían actuar como fuentes de trasmisión,diseminación y reservorios de dichas parasitosis. Al igual que T. gondii, ciertas especies deSarcocystis spp. y Cryptosporidium spp. son zoonóticas, la infección puede darse tras ingerirooquistes presentes en el agua, verduras mal lavadas o en el caso de los dos primeros,también por el consumo de carne cruda o mal cocida que contenga quistes tisulares1, 2. Entanto que N. caninum se destaca por producir abortos en bovinos, afectando negativamente suproducción, siendo el consumo de ooquistes presentes en el medio un modo de transmisión dela enfermedad3.Si bien mundialmente existen evidencias serológicas y moleculares sobre la presencia de estosprotozoarios en la fauna silvestre2, 3, 4, a nivel nacional la mayoría de los trabajos consiste enreportes de casos y no poseen un enfoque epidemiológico.El objetivo de este trabajo es determinar la presencia de los parásitos apicomplexapreviamente mencionados en mamíferos silvestres introducidos en Argentina y relacionar losgenotipos hallados con la interfaz animal-hombre-ecosistema con el fin de evaluar el rol de losmamíferos exóticos en la epidemiología de los mismos. Se trabajará con muestras tomadas deindividuos silvestres de N. vison, S. scrofa, C. elaphus, R. rattus y R. norvegicus en la provinciade Neuquén y con muestras tomadas de individuos de C. erythraeus, R. rattus y R. norvegicusen el noreste de la provincia de Buenos Aires a través de la colaboración con el Grupo deEcología Terrestre de Neuquén (CEAN-CONICET) y el Grupo Ecología de MamíferosIntroducidos de la Universidad Nacional de Luján, respectivamente.Los animales muestreados provienen de actividades dentro de programas de controlpoblacional y cuentan con la aprobación del CICUAL (Comité Internacional del Cuidado y Usode Animales de Laboratorio) correspondiente.Hasta el momento se muestrearon un total de 42 ejemplares de N. vison en el sur de laprovincia de Neuquén. De cada individuo se colectaron los siguientes tejidos: cerebro, pulmón,hígado, músculos de miembro posterior, lengua y corazón, que se conservaron a -20ºC, yúltima porción del intestino, heces y suero sanguíneo que fueron refrigerados. Del total devisones americanos muestreados se han analizado cerebros y pulmones de 18 de ellos (16adultos: 14 machos y 2 hembras, y una hembra subadulta y otra joven) para detectar ADN deT. gondii y N. caninum por la técnica de PCR. De cada órgano se realizó un homogenato con elfin de obtener una muestra representativa, y utilizando el kit comercial Wizard Genomic DNAPurification Kit (Promega, EE.UU.) se extrajo ADN de los tejidos siguiendo lasrecomendaciones del fabricante. Se utilizó el par de primers específicos TOX5/TOX8 yNp6+/Np21+ para la detección de T. gondii y N. caninum, respectivamente. Los productosamplificados se revelaron en un gel de agarosa al 1,5% con SYBR safe (Invitrogen, EE.UU.).La lectura se realizó con un transiluminador de luz azul (Safe Imager TM, Invitrogen,EE.UU.).Se observó la detección de bandas de 450 bp y 337 bp de T. gondii y N. caninum,respectivamente, tomando de referencia el marcador de peso molecular de 100 bp.A partir del suero sanguíneo se realizará la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) parala detección de anticuerpos anti-T. gondii y anti-N. caninum en todas las especies excepto enaquellas que carecen de conjugados específicos (N. vison y C. erythraeus), para las cuales sedesarrollará y estandarizará una prueba de aglutinación modificada para el diagnósticoserológico de toxoplasmosis (MAT). Además, se procesarán 10 gramos de músculo de cadaejemplar para la identificación en fresco de quistes tisulares de Sarcocystis spp. Sepreservarán los quistes observados en glutaraldehído al 2 % para estudios de caracterizaciónde la pared quística mediante microscopía de transmisión electrónica (MET) y para su posteriorcaracterización molecular. A su vez se realizarán raspados de mucosa intestinal con la finalidaddetectar ooquistes/esporozoítos tras la concentración de la materia fecal por técnicas deflotación. De forma semejante se concentrarán los ooquistes de Cryptosporidium spp.presentes en el producto del raspado de mucosa intestinal por sedimentación en agua,flotación en solución concentrada de azúcar y luego se coloreará por la técnica de ZiehlNeelsen (modificada) para poder observarlos. El material restante de las muestras positivas deambos protozoarios se concentrará por sedimentación-flotación para la caracterizaciónmolecular. Para los estudios moleculares se analizarán las muestras de tejidos (cerebro ypulmón) y de materia fecal previamente mencionadas por medio de la técnica de Reacción encadena de la Polimerasa (PCR) utilizando primers específicos.El 11% (2/18) de las muestras de cerebro resultaron positivas a T. gondii, en tanto que lospulmones de estos individuos fueron negativos.En ninguno de los tejidos analizados se detectó ADN de N. caninum.La presencia de ADN de T. gondii en el tejido nervioso es indicativo de una infección crónicaque pudo surgir de un ambiente contaminado con ooquistes o tras la ingestión de presasinfectadas debido a su dieta carnívora, motivo por el cual se considera a N. vison como unaespecie centinela que refleja el estado del ambiente gracias a sus hábitos acuáticos yterrestres. La ausencia de ADN de N. caninum en las muestras analizadas no descarta laposibilidad de infección en estos mamíferos exóticos, ya que es necesario evaluar mayorcantidad de animales. Se seguirán realizando estudios para determinar también la presencia delos otros parásitos protozoarios en estas especies exóticas de nuestro país.