LA DINÁMICA DEL CITOESQUELETO DE ACTINA AFECTA LA REPLICACIÓN DE METAPNEUMOVIRUS HUMANO

CÁMARA ALICIA; GIL PEDRO; RODRIGUEZ, PAMELA ELIZABETH; PAGLINI M. GABRIELA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA 2021; 2021

Sociedad Argentina de Virología

Metapneumovirus humano (MPVh) causa infección respiratoriaaguda con relevancia clínico-epidemiológica. Su aislamiento invitro es dificultoso y el efecto citopático es variable, por lo queel proceso de replicación es poco conocido. Algunos Pneumovirusutilizan el citoesqueleto para su replicación y morfogénesis,por lo que propusimos estudiar el rol de los microfilamentos deactina (MFls) en el ciclo de replicación. MPVh se aisló en célulasVERO (3er pasaje ciego) a los 14 dpi, se confirmó por Inmunofluorescencia(IF) y RT-PCR e identificó como MPVh A2. Se describióla curva de replicación, mediante cuantificación viral extracelularpor RT-qPCR, su máximo N° de copias de ARN viral/μl de sobrenadantefue a las 72 hpi. Se cuantificó la expresión de proteínaviral (F) intracelular (N° de puntos fluorescentes/célula infectadapor IF) con un máximo a las 8 hpi disminuyendo hasta las 96 hpi.Para determinar el rol de los MFls se utilizó Cytochalasina D (CytD)[2.5μM], ésta se aplicó durante la infección o las primeras 8 o 24hpi y se cuantificó la producción viral intracelular y extracelular adistintas hpi. El tratamiento con CytD previno la disminución del %de células infectadas en todos los tiempos ensayados. Además,CytD durante la infección y durante las primeras 8 hpi provocó unaumento significativo en el N° de puntos fluorescentes/célula infectada.Finalmente, CytD durante la infección y durante 8 hpi. incrementósignificativamente la producción viral extracelular, mientrasque el tratamiento durante 24 hpi disminuyó significativamente elN° de copias/μl a las 24 y 72 hpi.Se observó que las primeras 8 horas del ciclo de replicación deMPVh son cruciales para una producción viral exitosa. La disrupciónde los MFls durante ese tiempo resultó en un incremento en laexpresión de proteína viral intracelular y en la liberación al espacioextracelular. Estos resultados indican que los MFls participaríantanto en la internalización como en la salida de los viriones.