PERSONAL DE APOYO
MIGLIETTA Esteban Alberto
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de morfología mitocondrial semi-automatizado en imágenes de cultivos neuronales derivados de IPSCs usando FIJI-ImageJ
Autor/es:
MIGLIETTA, ESTEBAN A; PASCUALE, CARLA A; MORELLI, LAURA A.; ROSSI, ANDRÉS H
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; 7° Congreso de la Sociedad Argentina de Microscopía; 2022
Resumen:
El uso de imágenes de microscopía de fluorescenciay confocal es un pilar fundamental para los trabajos de investigación enciencias biológicas. En este contexto, el análisis cuantitativo no sesgado de dichasimágenes es clave para lograr resultados reproducibles y comparables entre sí.Sin embargo, en muchos casos, puede resultar complicado debido a la naturalezade las imágenes o del fenómeno a evaluar. En particular, el estudio de lamorfología mitocondrial presenta la dificultad adicional de que las estructurasde interés poseen geometrías complejas y muy variables. En este trabajo presentamos un protocolo de procesamientosemi-automatizado empleando FIJI/ImageJ para segmentar mitocondrias marcadascon Mito Tracker Red y extraer diversos parámetros morfológicos de interés apartir de un set de imágenes de microscopía confocal de cultivos de neuronas. Lasimágenes fueron obtenidas de neuronas diferenciadas a partir de IPSCs (célulasmadre pluripotentes inducidas) derivadas de pacientes con distintas mutacionesasociadas a la enfermedad de Alzheimer y potencialmente implicadas en elmetabolismo energético. El análisis fue realizado como parte de un servicio dela unidad de microscopía de la Fundación Instituto Leloir y por lo tanto fueciego a la identidad de los grupos de imágenes. Todos los pasos del análisis de las imágenesfueron incorporados a un script deImageJ que permitió procesar todos los archivos en conjunto de manera rápida yfácil, así como también iterar sobre los distintos parámetros del análisishasta lograr un proceso de análisis eficaz. Se emplearon distintas estrategias parafiltrar y suavizar el ruido de fondo previo a la segmentación de lasmitocondrias por umbrales y al filtrado de las mismas en base a su tamaño eintensidad. Todas las herramientas empleadas están incluidas en la distribuciónFIJI de ImageJ. Luego de extraer los parámetros morfológicos para cada una delos objetos (mitocondiras) segmentados, los datos se volcaron en un archivo.csv para luego ser analizados en R.
