DESARROLLO DE NUEVAS VLPs QUIMÉRICAS COMO ANTÍGENOS VACUNALES PARA COVID-19: DISEÑO, PRODUCCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE GLICOPROTEINAS DE FUSIÓN INNOVADORAS

FONTANA, DIEGO; GARAY, ERNESTO; GUGLIOTTA, AGUSTINA; VILLARRAZA, CARLOS JAVIER; FUSELLI, ANTONELA; ANTUÑA, SEBASTÍAN; RODRÍGUEZ, MARÍA CELESTE; CEAGLIO, NATALIA; PRIETO, CLAUDIO

Congreso; XIII CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA (CAV2021); 2021

Sociedad Argentina de Virología

Las partículas pseudovirales o VLPs (Virus-Like Particles) son estructuras macromoleculares autoensamblables que poseen una forma y tamaño muy similar al virus, pero carecen del ácido nucleico en su interior. Utilizando diversos sistemas de expresión heterólogos es posible generar el ensamblado de VLPs compuestas de proteínas estructurales virales, principalmente las glicoproteínas de superficie las cuales son normalmente el principal target de los anticuerpos neutralizantes. A su vez, en algunos casos es posible exponer epitopes heterólogos si estos son fusionados correctamente en la estructura de las proteínas. Con el objetivo de diseñar un candidato vacunal para COVID-19 de tipo VLPs, en este trabajo se diseñaron dos proteínas de fusión empleando la glicoproteína G del virus de la rabia (RVG), la cual es capaz de generar naturalmente VLPs, y regiones del ectodominio de la proteína Spike del SARS-CoV-2. Por un lado, en el extremo N-term de la RVG se fusionó la secuencia codificante del dominio de unión al receptor del SARS-CoV-2 (RBD). Y, por otro lado, el ectodominio completo de la proteína spike del SARS-CoV-2, estabilizado en su estado pre-fusión, se fusionó al dominio transmembrana y citoplasmático de la RVG. Posteriormente, se evaluó la expresión intracelular de ambas proteinas de fusión, demostrando su correcta localización subcelular en ensayos de citometría de flujo y microscopía confocal. Se pudo confirmar que en ambos casos el epitope heterólogo se encontraba correctamente expuesto sobre la superficie de la célula y colocalizado en la membrana plasmática de la misma. Además, se evaluó el brote de VLPs al sobrenadante de las células por western blot, TEM y gold-labeled TEM. Como siguiente paso, se estudiará la respuesta inmune inducida por las VLPs quiméricas en animales de experimentación, de modo de evaluar el potencial de las mismas como candidato vacunal para COVID-19.